两种生防活性蛋白Harpin<,Xooc>和AiiA的表达及生物活性检测

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jakynum1
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
农药伴随人类改造自然、征服自然已有一百多年的历史,在植物保护中发挥了巨大的作用,促进了农业发展,给人类带来了巨大的经济效益。然而使用农药所引起的副作用,如:病虫草产生抗药性、对非靶标生物的直接毒害、对环境的污染等,已成为了农业生产上迫切需要解决的问题。二十世纪70年代基因工程技术的出现,为解决这些问题提供了新的途径与思路。Harpins是革兰氏阴性植物病原细菌通过Ⅲ型泌出系统分泌的一类能诱导非寄主植物过敏反应和系统获得抗性的非特异性蛋白激发子。本研究采用PCR方法从水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola, Xooc)RS105菌株中扩增harpinXooc编码基因hrf2,将其克隆到酵母表达载体pPICZαA的分泌信号肽基因下游,获得重组表达质粒pPICZαA-hrf2。重组表达质粒线性化后电击转化至毕赤酵母(Pichia pastoris)宿主菌X-33,经抗生素Zeocin筛选和PCR鉴定后,得到重组酵母菌X-33/pPICZαA-hrf2。用甲醇诱导重组酵母菌表达目标蛋白,发酵上清液经浓缩后进行SDS-PAGE电泳分析,在约18 kD处有特异目标条带出现。Western Blot检测表明表达产物具有良好的抗原性。生物活性检测表明酵母重组表达蛋白harpinXooc能够诱导烟草产生过敏反应和促进烟草生长,活性高于在大肠杆菌中表达的harpinXooc。aiiA基因编码的N-酰基高丝氨酸内酯(AHLs)水解酶(AiiA蛋白)能降解细菌产生的AHLs信号分子,干扰该信号分子参与细菌群体感应的调控过程,抑制多种植物病原菌致病基因的诱导表达,从而减轻或消除病原菌的致病性。本实验根据已报道的aiiA基因序列设计引物,从枯草芽胞杆菌中成功扩增出一段长为753 bp的序列,测序后经blast比对,结果表明与已发表的aiiA基因序列相似性均在85%以上。将此基因克隆到pET30(a)表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,超量表达的蛋白在菌体中以包涵体形式存在;AiiA蛋白经SDS-PAGE电泳检测,表达产物分子量为28 kD。
其他文献
自从我国将“新基建”提升到国家战略层面以来,“新型数字基础设施建设”便以其蕴含的无限可能激活了电力行业的想象,特别是在今年,国家电网公司直指数字化在电网“新基建”
期刊
秋天里的约会,一年一度。两年前的9月,上海自贸区就像一个婴儿呱呱坠地,两年后,这个婴儿以惊人的速度成长为一个活力四射的少年。自始至终关注自贸区发展、自贸区金融创新试
本文首先对ERP系统进行了详细论述,之后分析了ERP系统在企业财务管理工作中的具体应用价值,说明了企业ERP财务管理系统的具体构建原则,并对构建的创新性举措进行详细阐述.旨
冯振伍,衣着俭朴,头发花白,身板硬朗,一见面就给人以精神矍铄、思维敏捷、言谈清晰的感觉,根本看不出是位年届88岁高龄的老人。1992年四川省扶贫基金会成立,冯振伍担任会长(
士官支委在行使权利、履行职责和日常工作中,应当具备“六量”:一是肩上有分量。时刻牢记肩负的职责,充分认清自身的权利,努力克服“人微言轻、可有可无”的错误 Noncommiss
新基建来袭 数字化转型正当其时rn2020年政府工作报告首次明确提出 “新基建” .6月,国家电网发布 “数字新基建” 十大重点建设任务,将以信息基础设施、融合基础设施、创新
期刊
一、现状rn为了重启经济,各国的政府都开始猛给自己打鸡汤,这里面就包括美国、日本计划将在华的企业搬回自己的国家.我国自2001年12月11日加入世界贸易组织(WTO)后,就承诺全
期刊
随着大数据时代的来临,现代企业在管理方面也应与时俱进,时代的不断进步为企业的转性发展奠定了良好基础.在企业管理工作中,财务管理尤为重要,因此为进一步完善企业的管理制
作为战略性新兴产业的重点发展方向,储能是智能电网、可再生能源高占比能源系统、“互联网+”智慧能源的重要组成部分,是紧密围绕落实“四个革命、一个合作”能源安全新战略
期刊
顺时取势 开启智能配电新世界rn电力作为当下最为高效的能源形式,对支撑全社会的正常运转发挥着重要作用,而电气数字化转型将能够为节能增效和低碳化方面贡献力量,从而助力绿
期刊