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副溶血弧菌(Vibrio parahaemololyticus,Vp)是水产品中的一种常见病原菌，食用副溶血弧菌污染的水产品极易引起食物中毒。本文应用特异性鸡IgY和兔IgG抗体，对4种检测副溶血弧菌的ELISA方法进行系统研究和比较，并对最佳检测方法进行了应用研究。
1.抗体的提取和纯化采用水稀释法粗提IgY抗体，再经硫酸铵盐析和DEAE-Sepharose FF离子交换层析纯化IgY抗体，10mg/mL纯化后IgY抗体效价为1：14400，比纯化前提高4倍。IgG纯化同样采用硫酸铵盐析和DEAE-Sepharose FF离子交换层析联用的方法，10mg/mL纯化后IgG抗体效价达到1：204800，比纯化前提高了16倍。
2.建立4种ELISA方法检测副溶血弧菌确定了4种检测副溶血弧菌的ELISA方法的工作条件、最低检出限、特异性及重复性。其中，建立的间接EIASA方法：IgY抗体最佳工作浓度为20μg/mL，对副溶血弧菌的最低检出限为105cfu/mL；建立的直接ELISA方法：酶标IgY抗体工作浓度为60μg/mL，对副溶血弧菌的最低检出限为106cfu//mL；建立的双抗夹心ELISA方法I：捕获抗体IgY工作浓度为40μg/mL，检测抗体IgG工作浓度为10mg/mL按1：3200稀释，工作条件为37℃包被反应2h，不封闭，捕获抗体与抗原于37℃结合2h，检测抗体与抗原于37℃结合1h，该方法对副溶血弧菌的检出限是2.5×104cfu/mL；建立的双抗夹心ELISA方法Ⅱ：捕获抗体IgG工作浓度为10mg/mL按1：51200稀释，检测抗体IgY工作浓度为10μg/mL，工作条件为37℃包被反应2h，不封闭，捕获抗体与抗原于37℃结合2h，检测抗体与抗原于37℃结合1h，该方法对副溶血弧菌的检出限是105cfu/mL。这4种ELISA方法对检测副溶血弧菌均有特异性和较好的重复性。
3.双抗夹心ELISA检测水产品中副溶血弧菌的应用经比较，四种方法中双抗夹心ELISA方法I是最佳的检测方法。将黄花鱼、金鲳鱼和基围虾样品分别接种副溶血弧菌并加入增菌液，使样品副溶血弧菌的含菌量为0.1cfu/mL、1cfu/mL和10cfu/mL，然后于蛋白胨水放置30℃、150r/min摇床中增菌。用双抗夹心ELISA方法I检测，含菌量为0.1cfu/mL时，黄花鱼和基围虾样品在增菌12h后检测呈阳性，黄立昌鱼样品增菌14h后检测呈阳性；含菌量为1cfu/mL时，黄花鱼和基围虾样品在增菌8h后检测呈阳性，黄立昌鱼样品增菌10h后检测呈阳性；含菌量为10cfu/mL时，黄花鱼和基围虾样品在增菌6h后检测呈阳性，黄立昌鱼样品增菌8h后检测呈阳性。定量检测建立的曲线方程为Y=0.21X-0.8189，R2=0.9941(X为标准菌悬液浓度的对数，Y为减去空白后的OD450值)，定量结果与定性结果一致。