唐菖蒲（Gladiolus hybridus Hort）是鸢尾科（Iridaceae）唐菖蒲属（Gladiolus）多年生单子叶球根花卉，是世界著名的四大切花之一。唐菖蒲切花生产是我国花卉产业的重要组成部分。唐菖蒲是病虫害发生最为严重的花卉之一，利用原生质体导入外源基因为唐菖蒲抗病育种带来希望。目前我国唐菖蒲的栽培品种和生产用球绝大多数从国外引进，唐菖蒲的品种繁育工作不足，唐菖蒲原生质体分离、纯化及培养技术的研究将为唐菖蒲育种工作奠定基础。 本试验以唐菖蒲子球茎为材料，建立唐菖蒲原生质体分离、纯化及培养体系。主要结果如下： 1．唐菖蒲子球茎诱导愈伤的培养基为：“超级玫瑰”MS+2，4-D3.0mg／L+6-BA0.5mg／L：“超级粉”MS+2，4-D4.0mg／L+6-BA0.5mg／L；“蓝精灵”MS+2，4-D4.0mg／L+6-BA005mg／L 2．三种类型唐菖蒲愈伤组织：Ⅰ型为近胚性愈伤，Ⅱ型为非胚性愈伤，Ⅲ型为中间型愈伤，其中Ⅰ和Ⅲ型愈伤组织培养2～3月后可得到胚性愈伤。胚性愈伤在MS+2，4-D2.0mg／L+6-BA0.5mg／L培养基上培养有利于唐菖蒲胚性愈伤的保持。 3．唐菖蒲悬浮培养细胞系的培养方法为：悬浮细胞的初始接种量为2g／40ml，初始继代周期2～3d，一个月后继代周期为5～8d。在悬浮培养基中加入2mg／L的甘氨酸，100mg／L的谷氨酸、300mg／L的水解乳蛋白、100mg／L的酵母提取物、500mg／L的牛血清白蛋白有助于原生质体活力的提高。 4．露醇保持唐菖蒲原生质体渗透压稳定的浓度为0.6mol／L。 5．唐菖蒲叶片在0.6mol／L甘露醇中预处理1h分离得到的原生质体产量和活力较高；继代培养2个月左右的悬浮培养细胞系分离的原生质体产量和活力较高。 6．叶片和悬浮培养细胞分离原生质体所用酶液的配比浓度分别为Cellulase“Onzuka”RS1.5％+Pectinase Y-23 0.5％和Cellulase“Onzuka”RS 2.0％+Pectinase Y-23 0.5％，酶解时间为2h，pH5.6；酶解的条件为：黑暗下27℃，于摇床上振荡酶解（40r／min）。 7．原生质体培养的方法为先液体后包埋法，其培养基分别为：叶片“超级玫瑰”KM₈P+2，4-D1.0mg／L，+NAA0.2mg／L+KT0.2mg／L，“超级粉”KM₈P+2，4-D1.5mg／L+NAA0.2mg／L+ZT0.2mg／L，“蓝精灵”KM₈P+2，4-D2.5mg／L+KT0.2mg／L+6-BA0.1mg／L；悬浮培养细胞“超级玫瑰”KM₈P+2，4-D2.0mg／L+NAA0.2mg／L+KT0.2mg／L，“超级粉”KM₈P+2，4-D2.5mg／L+NAA0.2mg／L+ZT0.2mg／L，“蓝精灵”KM₈P+2，4-D4.0mg／L+KT0.2mg／L+6-BA0.1mg／L。