安莎类抗生素大多具有抗细菌、抗肿瘤等活性,许多已经投入生产,还有一些因其特殊的作用靶位点而有可能开发出新型的药物。Hygrocins作为新近从S hygroscopicus ATCC29253中分离鉴定的安莎类抗生素,其生物合成基因簇还未见报道。通过染色体步移,我们克隆到92.677 kb完整的hygrocins生物合成基因簇,包含5个PKS核心基因,5个与前体物AHBA合成相关的基因,4个氧化酶基因、5个与调控相关的基因和一些未知功能的基因。通过生物信息学分析了 PKS基因中活性结构域的组成,预测了 AT domain的底物特异性,分析了还原性结构域的活性状态并推导了 hygrocins可能的生物合成过程。构建了 hygrocins基因簇中关键基因的中断或敲除突变株。首先中断了一个PKS核心基因获得突变株用于鉴定该基因簇。其次,在基因簇的两端各选取了两个基因进行中断实验,目前已经获得了两个正确的中断突变株。最后,构建了三个氧化酶基因和四个调控基因的双交换质粒,成功获得了 orf23的敲除菌株,其余的获得了单交换突变株,正在进行双交换突变株的筛选。另外,由于hygrocins与利福霉素B的分子结构相似,特别是大环中都有氧原子的掺入,而这显然是由氧化酶催化形成。本研究优化了利福霉素B产生菌地中海拟无枝酸菌S699的电转化条件,成功构建了利福霉素B基因簇中两个氧化酶基因rif-orf5和rifor16的敲除突变株,用于异源互补实验,辅助研究hygrocins的后修饰过程。