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目的:研究炎症介质-脂多糖(LPS)诱导的炎症应激是否通过激活mTOR通路,增加SCAP/SREBP2表达,干扰SCAP/SREBP2负反馈调控,增加THP-1巨噬细胞对非修饰低密度脂蛋白胆固醇(LDL)摄取,导致泡沫细胞形成。方法:1、诱导分化成功的THP-1源性巨噬细胞在无血清培养基中培养4h后,分为对照组(5ug/ml LDL),炎症刺激组(5ug/ml LDL+200ng/ml LPS),炎症+雷帕霉素组(5ug/ml LDL+200ng/ml LPS+10ng/ml Rapamycin),以上各组细胞培养24h后收获。2、油红O染色法检测细胞内脂质沉积情况。3、Real-time PCR法检测LDLr、SREBP2、SCAP、S6K1和mTOR m RNA水平。4、Western blot法检测LDLr、S6K1、和mTOR蛋白表达。5、激光共聚焦法检测SCAP在内质网与高尔基体间的转位情况。6、统计:统计软件SPSS20.0,数据表示为均数±标准差(mean±SD)。采用t检验分析两组差异,P<0.05表示差异有统计学意义。结果:1、油红O染色发现,炎症应激增加THP-1巨噬细胞内脂质沉积,雷帕霉素抑制炎症应激诱导的脂质聚积。2、THP-1巨噬细胞LDLr mRNA变化:对照组、炎症刺激组、炎症+雷帕霉素组LDLr mRNA的表达分别为1、1.82±0.35和0.33±0.14。炎症刺激组与对照组比较,LDLr mRNA显著上调(P<0.05);炎症+雷帕霉素与炎症刺激组比较,LDLr m RNA表达下调(P<0.05)。3、THP-1巨噬细胞SREBP2 mRNA变化:对照组、炎症刺激组、炎症+雷帕霉素组SREBP2 mRNA的表达分别为1、2.21±0.35和0.33±0.21。炎症刺激组与对照组比较,SREBP2 mRNA显著上调(P<0.05);炎症+雷帕霉素与炎症刺激组比较,srebp2mrna表达下调(p<0.05)。4、thp-1巨噬细胞scapmrna变化:对照组、炎症刺激组、炎症+雷帕霉素组scapmrna的表达分别为1、2.15±0.48和0.61±0.33。炎症刺激组与对照组比较,scap显著上调(p<0.05);炎症+雷帕霉素与炎症刺激组比较,scap表达下调(p<0.05)。5、thp-1巨噬细胞s6k1mrna变化:对照组、炎症刺激组、炎症+雷帕霉素组s6k1mrna的表达分别为1、1.26±0.22和0.8±0.5。炎症刺激组与对照组比较,s6k1mrna显著上调(p<0.05);炎症+雷帕霉素与炎症刺激组比较,s6k1mrna表达下调(p<0.05)。6、thp-1巨噬细胞mtormrna变化:对照组、炎症刺激组、炎症+雷帕霉素组mtormrna的表达分别为1、1.38±0.7和0.3±0.7。炎症刺激组与对照组比较,mtormrna显著上调(p<0.05);炎症+雷帕霉素与炎症刺激组比较,mtormrna表达下调(p<0.05)。7、thp-1巨噬细胞ldlr蛋白变化:炎症刺激组与对照组比较,ldlr蛋白表达显著上调(p<0.05);炎症+雷帕霉素与炎症刺激组比较,ldlr蛋白表达下调(p<0.05)。8、thp-1巨噬细胞s6k1蛋白变化:炎症刺激组与对照组比较,s6k1蛋白表达显著上调(p<0.05);炎症+雷帕霉素与炎症刺激组比较,s6k1蛋白表达下调(p<0.05)。9、thp-1巨噬细胞mtor蛋白变化:炎症刺激组与对照组比较,mtor蛋白表达显著上调(p<0.05);炎症+雷帕霉素与炎症刺激组比较,mtor蛋白表达下调(p<0.05)。10、激光共聚焦检测发现,炎症应激增加scap/srebp2复合物从内质网转位到高尔基体,雷帕霉素则抑制炎症应激诱导的scap/srebp2复合物从内质网转位到高尔基体。结论:1、炎症应激通过激活mtor通路,上调scap/srebp2表达,致scap/srebp2复合体转位至高尔基体异常增加,ldlr表达上调,致胆固醇聚积于细胞内,泡沫细胞形成。2、雷帕霉素能够逆转炎症应激诱导mTOR通路激活,减少细胞内胆固醇沉积,提示炎症应激状态下mTOR可能是泡沫细胞形成的关键通路。