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目前，人们着重于研究细菌和肠黏膜上皮细胞相互作用后肠道中抗菌肽表达水平的变化以及寄生虫感染后对肠道正常菌群的影响，而关于细菌对寄生虫感染的影响的报道较少，主要集中在益生菌如罗伊氏乳酸菌、干酪乳酸杆菌及嗜酸性乳酸杆菌对原虫感染的保护性研究。益生菌与微小隐孢子虫作用的研究主要集中在乳酸杆菌对卵囊排出的影响及检测部分细胞因子表达的情况，并未对肠道菌群定植情况进行检测，而且尚无致病菌定植后影响隐孢子虫感染的相关报道。肠道益生菌和致病菌定植肠道后对微小隐孢子虫感染的影响及肠道免疫应答还有待于进一步的研究。因此，本试验利用保加利亚乳酸杆菌和致病性大肠杆菌或者两种细菌同时定植BALB/c小鼠后，再利用微小隐孢子虫进行感染，观察卵囊排出规律、肠道内细胞因子、防御素和溶菌酶等变化进行检测。表明了保加利亚乳酸杆菌、致病性大肠杆菌或两者同时定植后对正常菌群和微小隐孢子虫感染小鼠的影响并为相关肠道免疫应答的研究提供一定的理论基础。乳酸菌和大肠杆菌定植小鼠肠道的检测将50只3周龄的BALB/c小鼠随机分为A、B、C、D、E5组，分别代表微小隐孢子虫组、乳酸菌组、大肠杆菌组、乳酸菌和大肠杆菌混合定植组及空白组。 B组连续人工灌喂10~8cfu乳酸杆菌；C组连续人工灌喂10~8cfu大肠杆菌、D组连续人工灌喂10~8cfu乳酸杆菌和大肠杆菌，A和E组灌服相同体积的PBS。每日为小鼠饮用添加5mg/L地塞米松（DEX）的高压灭菌水和饲料。一周后，检测粪样中菌群数量变化。利用荧光定量PCR技术对肠道菌群进行定量，结果显示与空白对照组相比，在B组及D组中，乳酸菌属的数量明显增加，表明所接保加利亚乳酸杆菌在肠道内成功定植。同样，在C组及D组中，大肠杆菌属数量明显增加，表明所接致病性大肠杆菌在小鼠体内成功定植。微小隐孢子虫卵囊排出及细胞因子表达的检测给A、B、C和D组小鼠人工灌喂1mL含5×10~5个微小隐孢子虫卵囊的PBS，然后观察各组小鼠卵囊排出规律。结果显示，B、C和D组小鼠从感染后第3d开始排出卵囊，卵囊排出量均于第11d左右达高峰，比A组提前2d。B组和C组相比感染量显著下降(p <0.05),和D组相比卵囊排出量无显著差异(p>0.05)。第11d卵囊排出高峰期时各组分别断颈处死小鼠，从回盲口处采集12cm小肠部分，平均分为3段，取其中一段收集肠组织离心后取上清，通过ELISA方法对IL-2、IL-4、IL-12、IFN-γ等细胞因子的表达量进行检测。结果显示与空白对照组相比，各组小鼠小肠中IFN-γ表达量均增加；乳酸菌组、乳酸菌和大肠杆菌混合定植组及微小隐孢子虫组中小鼠小肠中IL-2和IL-4表达量均增加，而大肠杆菌组中表达量均无明显变化；乳酸菌组、乳酸菌和大肠杆菌混合定植组及微小隐孢子虫组BALB/c小鼠小肠中IL-12表达水平均降低，而大肠杆菌组IL-12表达水平无显著差异。和微小隐孢子虫组相比，乳酸菌组IFN-γ表达量显著提高（450.67±19.33pg/mL vs356.42±18.60pg/mL，p<0.01）；乳酸菌和大肠杆菌混合定植组中IFN-γ表达量显著提高（409.36±20.10pg/mL vs356.42±18.60pg/mL p<0.05）；大肠杆菌组IFN-γ表达量显著下降（p<0.01）；乳酸菌组IL-12表达量显著下降（3.74±0.08pg/mL vs4.23±0.14pg/mL，p<0.05）；乳酸菌和大肠杆菌混合定植组IL-12表达量显著下降（3.68±0.13pg/mLvs4.23±0.14pg/mL，p<0.05）。结果表明保加利亚乳酸杆菌的定植提高IFN-γ、IL-2及IL4的表达水平，有利于机体的免疫反应,而致病性大肠杆菌的定植抑制IFN-γ、IL-2及IL4的表达。小鼠肠道防御素和溶菌酶表达的检测抗菌肽是具有广谱抗菌活性的小分子多肽，在宿主防御病原微生物入侵中起重要作用，主要由肠上皮细胞中的杯状细胞和潘氏细胞分泌。潘氏细胞位于肠腺底部，可以合成并分泌溶菌酶和防御素。本研究中，我们在微小隐孢子虫感染各组BALB/c小鼠后11d，采集各组小鼠小肠，分别提取RNA并反转录成cDNA. Real-time PCR结果显示，和空白对照组相比，在微小隐孢子虫组，小鼠小肠中溶菌酶表达量增高(p<0.05)，但是β防御素1表达量显著降低(p<0.01)；乳酸菌组中β防御素1和溶菌酶表达量无显著差异（p>0.05）；大肠杆菌组中β防御素1和溶菌酶表达量均无明显变化（p>0.05）；乳酸菌和大肠杆菌混合定植组中β防御素1表达量显著升高(p<0.01)，而溶菌酶表达量和空白组相比无显著差异。和微小隐孢子虫组相比，乳酸菌组和大肠杆菌组β防御素1表达量显著增加，溶菌酶表达量下降。经过组织切片和H·E染色后观察发现，大肠杆菌组、微小隐孢子虫组及乳酸菌和致病性大肠杆菌共同定植的BALB/c小鼠小肠中的杯状细胞数量均增加。这些表明保加利亚乳酸杆菌、致病性大肠杆菌或者两种菌共同定植后在微小隐孢子虫感染过程中都促进β防御素的表达，但是抑制溶菌酶的表达，同时杯状细胞在宿主防御反应中发挥着积极作用。