兴奋剂中重组蛋白的检测是一项非常艰巨的工作,其中典型蛋白质如rhEPO自1990年WADA和IOC禁用到2000年官方检测方法出台用了十年多的时间。但此检测过程耗时费力,对检验员实验技巧的要求也很高,而且所有这些方法都有产生检测假阳性的可能。傅立叶变换离子回旋共振质谱仪(FT-ICRMS)具有高分辨率,高灵敏度,宽的质量范围,多重独特的裂解技术,可以鉴定蛋白质翻译后修饰位置及修饰结构,实现混合物中目标物的准确检测,具有很好的定量优势,不仅在肽类兴奋剂滥用检测中有良好的应用前景,而且在临床低含量蛋白质基体样品的准确测量中有很高的实用价值。重组人促红细胞生成素(rhEPO)是一种具有典型代表性的糖蛋白,含有三个N-连接糖基化位点和一个O-连接糖基化位点。本研究采用蛋白酶Glu-C有效的酶解了EPO-a样品,利用液相色谱-线性离子阱质谱法鉴定了EPO-a样品酶解后的多肽片段和糖肽片段,通过碰撞活化解离(CAD)分析,推导出O-连接糖肽糖链的结构。但对于N-连接糖肽的分析,由于其在线性离子阱质谱上响应较低,进行二级碎裂的时候,由于母离子浓度较小,难以得到有效的糖链碎裂片段。采用傅立叶变换离子回旋共振质谱法(FT-ICRMS),利用CAD技术和电子捕获解离(ECD)技术的互补性,进一步分析了rhEPO-α中O-连接糖基化位点及糖基化结构,成功鉴定了O-连接糖基化结构,并对O-连接糖肽的两种不同价态的ECD断裂方式做了进一步的探讨分析,同时对N-连接糖基化结构进行了初步分析。本研究工作为EPO的检测鉴定提供了一种简单快速的检测方法,同时为糖蛋白中0-连接糖基化位点的研究提供了一种新方法,为开发准确可靠的肽类兴奋剂rhEPO基体检测方法奠定了基础。