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第一部分原发性免疫缺陷病的新生儿筛查目的:本研究拟首先试点建立原发性免疫缺陷病新生儿筛查体系,利用现行的干血片新生儿筛查体系,对重症联合免疫缺陷、抗体缺陷实施T/B细胞抗原受体剪切环(TRECs/KRECs)定量PCR检测,从而提供我国不同胎龄、不同产重新生儿TRECs/KRECs值的正常参考范围,同时早期发现PID病患,早期进行诊断和治疗。方法:本研究通过建立联合检测TRECs、KRECs以及管家基因RNase P的三重实时荧光定量PCR方法,对5039份新生儿干血片DNA进行检测,同时将该方法与国际现有的Roche检测方法进行比较。结果:本研究所采用的三重实时荧光定量PCR方法具有操作简单、重复性高、线性范围广以及分辨率高等优点。与Roche相对定量PCR方法相比,该三重实时荧光定量PCR方法能够对新生儿干血片DNA中TRECs和KRECs的含量进行绝对定量检测,并且该方法对KRECs的检测更为敏感。本次研究共纳入新生儿干血片5039份,新生儿的平均胎龄为39+2周,其中早产儿有174例、过期产儿有10例,新生儿的平均出生体重为3310 g,其中极低体重儿有1例,低体重儿有111例,巨大儿有205例。干血片DNA的平均浓度为11.4(3.4-23.3)ng/μL。新生儿TRECs的平均值和中位数分别为288和255 copies/μL全血;KRECs的平均值和中位数分别为187和156 copies/μL全血。5039例样本中有2例DNA提取质量不合格,经过第二次打孔提取DNA后,RNase P仍低于2000 copies/μL全血,但该样本TRECs和KRECs拷贝数均正常。初次打孔检测提示TRECs异常的新生儿有7例,其中4例重新打孔检测后结果为正常。第二次打孔后TRECs仍异常的3例新生儿中,1例新生儿TRECs为0且已召回。初次打孔检测提示KRECs异常的新生儿有52例,其中46例重新打孔检测后结果为正常。第二次打孔后KRECs仍异常的6例新生儿中,1例已召回,其余因2019冠状肺炎疫情未能及时随访。早产儿TRECs的拷贝数低于足月儿,而不同出生体重的新生儿TRECs、KRECs、RNase P没有明显差异。但是,早产儿和低体重儿的二次打孔率要明显高于正常新生儿。对TRECs为0的新生儿进行淋巴细胞分类和精细免疫分型检测,结果表明其CD3~+T细胞、CD8~+T细胞及CD4~+T细胞数量及比例明显降低,且CD8~+T细胞和CD4~+T细胞均以耗竭细胞和记忆细胞为主,CD19~+B细胞和NK细胞数量正常,该患儿符合T~-B~+NK~+SCID的免疫学表型。结论:本研究成功建立了对TRECs、KRECs和RNase P进行联合检测的三重实时荧光定量PCR方法,该方法操作简单、重复性高、线性范围广以及分辨率高,并且成本较低,可适用于原发性免疫缺陷病的新生儿筛查。本研究首次在国内确定了新生儿TRECs和KRECs的参考范围,并筛查出一例TRECs为0、免疫表型符合T~-B~+NK~+SCID的新生儿,为推动国内PID的新生儿筛查提供了技术支持和经验。第二部分LRBA/CTLA4缺陷患儿阿巴西普治疗有效性研究目的:分析2例LRBA基因突变病人及1例CTLA4基因突变病人的临床、免疫学特点及治疗,随访患儿使用阿巴西普治疗前后的情况,为提高该类病人的临床诊疗水平提供经验。方法:以2例LRBA基因突变病人及1例CTLA4基因突变病人为研究对象,收集每位患者的临床表现和详细治疗过程,包括糖皮质激素、IVIG、免疫抑制剂以及阿巴西普的使用。对三名患儿的基因组DNA进行全外显子组测序并通过Sanger测序验证患儿及其父母的LRBA和CTLA4基因突变。使用流式细胞术检测患儿Treg细胞、CTLA4表达水平以及阿巴西普治疗前后的c Tfh细胞。结果:三例患儿均以慢性腹泻、低钾血症,肝脾淋巴结肿大、反复感染和低血球蛋白血症为主要表现。患儿Treg细胞比例明显减少,CTLA4表达水平降低,c Tfh细胞的比例明显增加。尽管给予了免疫抑制剂和免疫球蛋白治疗,但患儿仍有反复腹泻。因此,患儿接受了靶向药物阿巴西普治疗。随访结果表明,患儿的肠病得到明显改善,消化道内镜检查提示炎性病变和滤泡增生有明显缓解。此外,使用阿巴西普治疗后c Tfh细胞的比例降低。结论:阿巴西普靶向治疗能有效缓解LRBA和CTLA4缺陷患儿的临床症状,尤其是肠病的表现。同时,c Tfh细胞可以作为随访疾病活动性和评价阿巴西普有效性的指标。