【摘 要】
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实验室前期从猪尸体好氧堆肥样品中获得了一株固氮能力强的优势菌株P.aeruginosa lg2-2。P.aeruginosa是工业上生产鼠李糖脂的菌属,并在石油柴油等污染的环境修复中被广泛应用。本研究旨在探明P.aeruginosa lg2-2在含鸡油、玉米油、豆油、甘油、矿物油等不同碳源的培养基中产鼠李糖脂的能力,并确定P.aeruginosa lg2-2产鼠李糖脂的最佳培养基。主要研究结果如下
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实验室前期从猪尸体好氧堆肥样品中获得了一株固氮能力强的优势菌株P.aeruginosa lg2-2。P.aeruginosa是工业上生产鼠李糖脂的菌属,并在石油柴油等污染的环境修复中被广泛应用。本研究旨在探明P.aeruginosa lg2-2在含鸡油、玉米油、豆油、甘油、矿物油等不同碳源的培养基中产鼠李糖脂的能力,并确定P.aeruginosa lg2-2产鼠李糖脂的最佳培养基。主要研究结果如下:1.利用CTAB蓝色凝胶培养基和排油圈法验证了P.aeruginosa lg2-2具有产鼠李糖脂的能力。2.P.aeruginosa lg2-2在鸡油、玉米油、豆油、甘油、矿物油等不同碳源培养基产鼠李糖脂的能力依次为矿物油＞鸡油＞玉米油＞大豆油＞甘油;通过响应面分析法对培养基优化得出最佳的培养基配方为:硫酸镁:0.39g/L;硝酸钠:12.31g/L;磷酸氢二钠:1.24g/L;磷酸二氢钾:0.41g/L;鸡油:8%（V/V）;微量元素:4ml/L;Na Cl:0.6g/L;接种量:2%（V/V）;Ca Cl2:0.01g/L。利用优化后培养基获得的最大鼠李糖脂产量为782.55mg/L,粗品获取率为71.18%,以鸡油为碳源产鼠李糖脂对液体石蜡的乳化性能最好（57.8%）,临胶约束浓度最低（60mg/L）。3.利用PCR扩增技术鉴定了P.aeruginosa lg2-2具有鼠李糖脂合成酶基因Rhamnosyltransferase subunit A（Rhl A）、Rhamnosyltransferase subunit B（Rhl B）、Rhamnosyltransferase subunit C（Rhl C）。RT-PCR结果发现P.aeruginosa lg2-2以鸡油为碳源时,鼠李糖脂合成酶基因Rhl A、Rhl B、Rhl C的m RNA表达量在24h-48h最高,且显著高于同一发酵时期的甘油和玉米油;比较不同碳源条件下的烷烃氧化酶表达量,结果表明以鸡油为碳源时,烷烃氧化酶基因几乎不表达,推测出本试验中烷烃氧化酶不能有效降解鸡油中饱和脂肪酸,以甘油和玉米油为碳源时,烷烃氧化酶Alk B2在发酵后期少量表达,能降解玉米油和甘油中长链的不饱和脂肪酸。
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