论文部分内容阅读
目的:用微滴式数字PCR(ddPCR)对miR-155、miR-99b和let-7a进行绝对定量,检测miR-155、miR-99b和let-7a在原发性结直肠癌患者及结直肠癌肝转移患者血浆中的表达量,探讨miR-155、miR-99b和let-7a三种miRNA在结直肠癌肝转移(CRLM)早期诊断方面的价值,为CRLM的监测提供新思路。方法:选取14例健康体检者,16例原发性结直肠癌患者和11例结直肠癌肝转移患者血浆标本采用探针法实时荧光定量PCR技术(qPCR)检测患者血浆中miR-155、miR-99b和let-7a的表达情况,检测TaqMan探针的效果。选取30例原发性结直肠癌患者和34例结直肠癌肝转移患者血浆标本,采用ddPCR的方法检测2组患者血浆中miR-155、miR-99b和let-7a三种miRNA的表达情况,并结合临床资料进行分析。最后,将qPCR和ddPCR检测所得数据进行对比分析。结果:1.qPCR检测结果:以健康体检者为对照组(CG),与CG相比,miR-155在原发性结直肠癌患者和结直肠癌肝转移患者血浆中高表达(P<0.05),而miR-99b和let-7a在结直肠癌患者和结直肠癌肝转移患者血浆中低表达(P<0.05)。(2)原发性结直肠癌患者和结直肠癌肝转移患者血浆miRNA表达量差异没有统计学差异。(3)二元logistic回归和受试者工作特征曲线(ROC)示:与CG相比,原发性结直肠癌患者血浆中miR-155、miR-99b和let-7a的曲线下面积(AUC)分别为0.831,0.867,0.759,联合后miR-155+miR-99b+let-7a的AUC为0.971;结直肠癌肝转移患者血浆中miR-155、miR-99b和let-7a的AUC分别为0.727,0.838,0.883,联合后miR-155+miR-99b+let-7a的AUC为0.981。联合指标的诊断效能大于单一指标的诊断效能。2.ddPCR检测结果:(1)与原发性结直肠癌患者相比,miR-155的表达量在结直肠癌肝转移患者血浆中显著上调(P<0.05),而miR-99b的表达量在结直肠癌肝转移患者血浆中显著下调(P<0.05),let-7a的表达量在结直肠癌肝转移患者血浆中无显著差异。(2)二元logistic回归和ROC分析发现,结直肠癌患者相比,结直肠癌肝转移患者miR-155、miR-99b、CEA的AUC分别为0.801,0.712,0.589,联合后miR-155+miR-99b的AUC为0.874;联合指标的诊断效能大于单一指标的诊断效能。(3)临床数据基数对比:选取的原发性结直肠癌患者和结直肠癌肝转移患者在性别、年龄、肿瘤大小、分化程度上无显著性差异。3.qPCR与ddPCR结果对比分析:(1)ddPCR与qPCR的检测结果显示:ddPCR灵敏性明显高于qPCR。(2)ddPCR与qPCR检验效能比较:ddPCR的检验效能明显高于qPCR的检验效能。(3)ddPCR与qPCR检测相关性分析:miRNA表达量ddPCR与qPCR检测结果具有一致性,miR-155的表达量ddPCR检测结果与qPCR检验结果相关系数r=0.83,P<0.05,相关性较高,具有统计学意义。miR-99b的表达量ddPCR检测结果与qPCR检验检测结果相关系数r=0.75,P<0.05,相关性较高,具有统计学意义。结论:miR-155和miR-99b的表达量在原发性结直肠癌患者和结直肠癌肝转移患者血浆中存在显著的表达差异,let-7a的表达量在原发性结直肠癌患者和结直肠癌肝转移患者血浆中未见显著性差异。与qPCR相比,ddPCR具有更高的检测灵敏度,更适合检测血浆中微量的miRNA。以ddPCR技术检测miR-155和miR-99b的表达,在CRLM的监测过程中可能会发挥巨大作用。