论文部分内容阅读
目的在实验室前期工作中,我们运用miRNA表达谱芯片初步挑选了2、4 Gy X射线辐照前与辐照后人肺腺癌A549细胞差别表达的miRNA,发现miR-21的表达水平发生了显著改变,本实验拟进一步研究miR-21在肺癌患者组织、血清中的表达与肺癌患者生存、预后等因素之间的关系,探讨电离辐射对肺癌患者与A549细胞体内外miR-21表达的影响及意义。方法收集20例肺癌患者术后肺组织病理样本与临床资料,分别为10例腺癌(adenocarcinoma,ADC)与10例鳞癌(squamous cell carcinoma,SCC),以相邻正常肺组织作为对照,同时收集103例肺癌患者血清样本与临床资料,其中包括87例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)与16例小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC),非小细胞肺癌患者中有62例腺癌与25例鳞癌,并随机选取30例健康体检者的血清作为正常对照,以实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)法检测肺组织及血清中miR-21的表达水平,并对非小细胞肺癌患者进行生存分析。以2、4 Gy剂量的X射线分别照射体外培育的A549细胞,并取辐照后各时间点的A549细胞,以实时定量PCR法检测A549细胞中miR-21的表达变化水平,0 Gy非辐照的A549细胞作为阴性对照组。将0、2、4 Gy剂量X射线辐照的A549细胞经鼠尾静脉注射入各组裸鼠,制备裸鼠肺转移癌的动物模型,以实时定量PCR法检测裸鼠血清及肺组织中miR-21的变化程度,用于空白对照组的裸鼠则未注射A549细胞。将各组miR-21的表达水平高于对照组平均值的1.8倍及以上者定义为阳性。本研究采用SPSS23.0软件对数据作出统计学分析,P<0.05作为差异具有统计学意义。结果20例肺癌患者术后病理组织中miR-21高表达者占60.0%(12/20),腺癌(5/10)与鳞癌(7/10)组织之间检出率的差异无统计学意义(P>0.05)。103例肺癌患者血清中miR-21高表达占50.5%(52/103),腺癌与鳞癌之间检出率差异有统计学意义(χ~2=5.766,P=0.016)。在103例肺癌患者中,放疗组患者血清miR-21的阳性检出率为63.1%(29/46),显著高于未放疗组的检出率40.4%(23/57)(χ~2=5.244,P=0.022);在87例非小细胞肺癌的患者中,放疗组患者血清miR-21的阳性检出率为66.7%(26/39),显著高于未放疗组的检出率39.6%(19/48)(χ~2=6.321,P=0.012),Kaplan-Meier法作生存分析显示,miR-21高表达患者预后显著地低于低表达的患者,差异具有统计学意义(P<0.005),Cox回归模型作多因素分析后显示,非小细胞肺癌患者miR-21高表达(P=0.001)与区域淋巴结转移(P=0.037)及放疗(P=0.041)均为影响患者预后的独立危险因素。2、4 Gy剂量X射线照射A549细胞后不同时间点miR-21表达显著升高(t=-7.552~-1.206,P<0.05)。将经0、2、4 Gy剂量X射线照射后的A549细胞由尾静脉注射入裸鼠体内后,miR-21在裸鼠血清及肺组织中的表达水平差异显著升高(t=-47.845~-2.356,P<0.05)。结论在肺癌患者术后病理组织标本中,miR-21检出率鳞癌高于腺癌,在所有肺癌患者血清样本中,鳞癌血清miR-21检出率显著地高于腺癌及小细胞肺癌者,提示miR-21的表达程度可能与肺癌本身的病理类型相关,其可作为肺癌病理诊断方面的新的潜在生物标志物。在所有肺癌患者与非小细胞肺癌患者两组别中,放疗组血清miR-21的检出率均显著地高于未放疗组的患者,结果初步提示电离辐射(放疗)可能会增加miR-21的表达,Kaplan-Meier法生存分析与Cox回归模型分析共同提示,miR-21有可能作为非小细胞肺癌患者预后判断的新指标及治疗的潜在新靶点。体外以一定剂量的X射线辐照A549细胞后各不同时间点,miR-21的表达变化均有一定水平的升高,说明2、4 Gy剂量X射线辐照可增加A549细胞miR-21的表达;在裸鼠肺转移模型结果中,裸鼠血清及肺组织中miR-21表达水平较空白对照组均显著升高,进一步说明2、4 Gy X射线照射后的A549细胞亦能增加miR-21在肺组织及血清中的表达水平,提示miR-21可能参与辐射诱导的A549细胞生物学活性改变的调控,并可能促进其在体内的侵袭转移过程。