论文部分内容阅读
MAN2C1是本实验室克隆的cDNA编码的1个人α-甘露糖苷酶。我们原先称它为6A8 α-甘露糖苷酶。国际已命名此酶为mannosidase,alpha,class 2C,member 1[Homo sapiens],简称MAN2C1。其相应的基因位于染色体15q11-q13。HUGO基因命名委员会命名此基因为Man2c1。MAN2C1的分子量在非糖基化情况下为116kDa。
为了在整体水平研究MAN2C1的生物学功能,本实验室用显微注射线性pIRES2-EGFP-MAN2C1的方法,制备了转Man2c1基因的ICR小鼠。本论文工作用基因组PCR的方法检测Man2c1基因整合入小鼠基因组的情况。在113只原代小鼠中,共检测到8只阳性小鼠。经配对繁殖得到F1代小鼠。基因组PCR检测见~1/2小鼠为阳性。阳性F1代小鼠合笼在F2代有~3/4小鼠阳性。F3代小鼠约有80%-90%的阳性。用RT-PCR检测了Man2c1基因在转基因鼠尾部组织中的转录,在7个系的小鼠中有4个为Man2c1 mRNA阳性。这表明,己成功制备了转Man2c1基因小鼠。在35#转基因小鼠观测到毛稀疏的表型变化。本论文工作研究了Man2c1基因表达对移植性肿瘤生长及对体液性免疫的影响。在小鼠荷瘤实验中,观察到转基因小鼠的肿瘤生长明显快于非转基因小鼠,且肿瘤在前者呈浸润性生长,并有引流淋巴结转移,而在后者,大部分肿瘤有完整的包膜,也无淋巴结转移。这表明转入的Man2c1基因表达促进肿瘤生长。在对相关机制的探索中,观察到转基因小鼠脾脏单个核细胞中的NK细胞百分率增高,但脾脏单个核细胞对YAC-1细胞的杀伤无变化。在体液性免疫实验中,小鼠用BSA免疫,见转基因小鼠的脾脏大于非转基因小鼠,但血清抗BSA抗体的滴度却低于非转基因鼠。
为进一步了解MAN2c1的生物学意义,本论文工作还藉RNAi技术抑制小鼠NIH-3T3细胞的Man2c1基因表达,探索了Man2c1基因表达对细胞在培养中生长的影响。但未见阳性结果。