KIF20A在结直肠癌中的表达及其生物学功能研究

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目的:明确KIF20A(Kinesin family member 20A)在结直肠癌组织中的表达,并分析KIF20A与结直肠癌患者临床病理参数及预后的关系;进一步探讨沉默KIF20A对结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法:分析TCGA数据库中KIF20A在结直肠癌组织及癌旁正常组织中的mRNA表达水平;采用Western blot进一步验证KIF20A在本中心8对结直肠癌组织与癌旁正常组织中的表达水平;采用免疫组织化学方法检测KIF20A在105例结直肠癌患者肿瘤组织标本中的表达水平,采用χ~2检验分析KIF20A与临床病理参数之间的关系,应用Kaplan-Meier进行生存率分析,Cox比例风险模型进行总体生存率和无复发生存率的单因素和多因素分析KIF20A在结直肠癌预后中的临床价值。采用RT-PCR和Western blot分别检测5株结直肠癌细胞系中KIF20A的表达水平,筛选出两株显著高表达的细胞系(HCT116和SW1116)进行后续细胞功能实验;采用SiRNA干扰的方法,敲低结直肠癌细胞系中KIF20A的表达,RT-PCR和Western blot进一步验证KIF20A的敲低效果;应用CCK-8细胞增殖实验、Transwell小室实验和划痕实验分别检测敲低KIF20A对结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。结果:1.TCGA数据库分析结果表明,KIF20A在非配对结直肠癌组织中高表达,在癌旁正常组织中表达阴性或低表达(P<0.001);同样,相较癌旁正常组织,KIF20A在配对结直肠癌组织中也呈现高表达(P<0.001);Western blot进一步验证了KIF20A在本中心8对结直肠癌组织中高表达。2.免疫组织化学结果表明KIF20A在结直肠癌组织中的阳性及阴性表达率分别为64%(67/105)和36%(38/105),差异具有统计学意义(P<0.05)。3.临床病理相关性分析表明:KIF20A高表达与肿瘤浸润程度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期有显著相关性(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明:KIF20A高表达的患者较低表达患者的总体生存时间、无复发生存时间显著缩短(P<0.001),预后差。COX回归分析显示KIF20A是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素。4.RT-PCR和Western blot结果表明,KIF20A在HCT116和SW1116两株细胞中有更为显著的表达,被选为用于后续的细胞功能实验。5.CCK-8实验结果表明敲低KIF20A可抑制结直肠癌细胞的增殖能力。6.Transwell小室实验和划痕实验结果均表明敲低KIF20A可抑制结直肠癌细胞的侵袭和迁移能力。结论:KIF20A在结直肠癌组织中表达显著上调,KIF20A表达是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素;敲低KIF20A可抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。以上结果均提示KIF20A在结直肠癌的发生发展过程中发挥着重要作用。
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