【摘 要】
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中度嗜盐菌Halomonas sp.C6分离自新疆盐湖,可在0.5ˉ25﹪ NaC1的条件下生长, 最适生长的NaC1浓度为3ˉ10﹪.其基因文库已被构建,通过逐步亚克隆分离到了与耐盐有 关3.2kb DNA片
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中度嗜盐菌Halomonas sp.C6分离自新疆盐湖,可在0.5ˉ25﹪ NaC1的条件下生长, 最适生长的NaC1浓度为3ˉ10﹪.其基因文库已被构建,通过逐步亚克隆分离到了与耐盐有 关3.2kb DNA片段.通过分析得知该片段由可能转座酶A基因(tnpA)和插入序列IS903组成. 其中,可能转座A酶基因长1,707bp,编码568个氨基酸.仔细分析其1-171bp区,发现该区 含有核糖体结合位点GAGG和多个与渗透调节基因启动子类似的启支区.为了鉴定C6可能转座酶A的启动区,该研究在已知该DNA片段序列的基础上,进行了酶切位点分析,并选用pCI为 亚克隆载体,pBluescriptSK (+)为测序载体,pHN127为启动子探针载体,通过直接亚克隆 法构建了重组质粒pFZC2和pFZC3,并在pHN127无启动子的绿色荧光蛋白报告基因gfp上游分 别插入包含该可能转座酶A基因启动区在内970bp和370bp的DNA片段,得到质粒pFZC1和pFZC4,将这两种重组质粒分别转化肠杆菌DH5α,得到了转化子FZC1和FZC4.在紫外光下两种转 化子均可产生绿色荧光.构建测序载体pFZC5,对pFZC4中370bp外源DNA片段进行测序,结果显示该启动区核苷酸序列未发生改变,由此证明可能转座酶A基因的启动子具有活性.通过 对转化子FZC4在含有不同盐浓度LB培养基上的荧光强度得知,该启动区在无NaCl时没有活性,但能在含NaCl的LB培养基上表达,并随NaCl浓度的增加其表达有增强的趋势.由此,初步证明该启动区的活性与盐浓度有关.
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