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胶质瘤是中枢神经系统中发病率最高的原发性肿瘤。恶性胶质瘤具有生长速度快,侵袭能力强,复发率高等特点。随着治疗手段的不断提高,胶质瘤患者的生存期已在不同程度上得到了延长,但是恶性胶质瘤的预后仍然很差。因此,寻找治疗胶质瘤的新方法势在必行。近年来随着在分子水平对胶质瘤研究的深入,寻找胶质瘤发病相关基因以及从基因水平上对胶质瘤进行防治已成为胶质瘤研究的新热点。mi RNAs是一类长约22nt的非编码RNA,能够通过与靶m RNA的3’UTR区结合后抑制靶m RNA翻译或导致靶基因的m RNA降解。从而在转录后水平调控基因表达。迄今为止已有多个mi RNAs被发现在肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。根据mi RNA在肿瘤中发挥作用的不同,mi RNA被分为促癌mi RNAs和抑癌mi RNAs。本课题组前期应用基因芯片对8例胶质瘤(WHO,IV)标本及其对应瘤旁脑组织的mi RNA表达谱进行了研究。结果发现有44个mi RNAs在胶质瘤中的表达较瘤旁脑组织降低。在这44个mi RNAs中mi R-758-3p表达相对较低且个体差异性较小。所以我们选择mi R-758-3p进行深入研究。我们通过搜索靶基因预测网站(TARGETSCAN,MICRORNA.ORG,MIRDB等)发现mi R-758-3p与WHSC1m RNA存在潜在结合位点。本课题重点研究了mi R-758-3p在胶质瘤中的表达,并通过转染mi R-758-3p模拟物观察其对胶质瘤生长的抑制作用并初步探索了其作用机制。以期为胶质瘤的治疗提供新的靶点。本课题研究分为三个部分。第一部分中通过实时定量PCR(real time PCR)检测6例胶质瘤及6例非肿瘤脑组织中mi R-758-3p的表达,发现mi R-758-3p在胶质瘤中表达降低,这与基因芯片结果一致。为选择合适的细胞系进行进一步的研究,我们通过Real Time PCR检测了5种细胞系中mi R-758-3p的表达。结果显示mi R-758-3p在U87和LN229两个细胞系中的表达较其他三种细胞系低。所以我们选择U87和LN229两个细胞系作为进一步研究的研究对象。第二部分用mi R-758-3p的模拟体转染人脑胶质瘤细胞系U87和LN229,并通过Real time PCR和流式细胞术检测mi R-758-3p的转染效果。进一步通过MTT检测转染模拟体后的胶质瘤细胞的增殖能力。通过流式细胞术检测胶质瘤细胞的细胞周期分布和凋亡比率。通过Transwell法检测胶质瘤细胞侵袭和迁移能力的改变,建立U87裸鼠皮下荷瘤模型,肿瘤模型分为NC组(无义序列组,Negative Control)和mi R-758-3p组,每组5只共10只。肿瘤形成后在瘤体进行多点注射治疗。每3天测量1次肿瘤大小,动态记录肿瘤生长情况。结果显示上调mi R-758-3p的表达后,与NC组比较:细胞增殖能力减弱(P<0.05);凋亡细胞比例明增加(P<0.05);G0/G1期细胞比例明增加(P<0.05);迁移和侵袭能力降低(P<0.05);小鼠肿瘤生长速度减慢,肿瘤体积明显小于NC组。第三部分通过TARGETSCAN,MICRORNA.ORG,MIRDB三个数据库筛选mi R-758-3p的潜在靶基因,从中寻找感兴趣的靶基因。再利用实时定量PCR和Western blot检测转染后胶质瘤细胞中该基因的表达情况。通过荧光素酶报告实验验证该基因是否为mi R-758-3p的直接作用靶点。Western blot检测细胞周期、凋亡、侵袭和迁移相关蛋白的表达。经过以上三个数据库的筛选,我们将mi R-758-3p的靶基因锁定为WHSC1。PCR结果显示转染mi R-758-3p模拟体后WHSC1 m RNA的表达量较NC组没有显著变化,而Western blot结果显示转染mi R-758-3p后WHSC1蛋白的表达量较NC组明显降低(P<0.05)。,在荧光素酶报告实验中,mi R-758-3p组较NC组荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。同时,与NC组相比mi R-758-3p组Cyclin D1、MMP2、Bcl-2等蛋白的表达量明显下降(P<0.05),Bax蛋白的表达量显著增高(P<0.05)。结论:mi R-758-3p在胶质瘤中较非肿瘤脑组织表达低,mi R-758-3p能够通过调节WHSC1的表达使胶质瘤细胞增殖能力减弱,凋亡细胞比例增加,细胞周期受到阻滞,迁移和侵袭能力明显减弱,并影响了细胞周期、凋亡、侵袭相关蛋白的表达,从而发挥了抑制胶质瘤细胞生长的作用。