LPTS抗体的制备及LPTS相互作用蛋白LBP2的基因克隆与功能研究

来源 :华东师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:adder2001
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
LPTS(a novel liver-related putative tumor suppressor)是本实验室利用差异表达的EST信息克隆的一个新的候选肿瘤抑制基因,定位于人染色体8p23区,该区域是肝癌发生染色体杂合性缺失(LOH)的高频区。LPTS的功能研究表明可以抑制肿瘤细胞的增殖,并具有端粒酶抑制活性。我们制备了LPTS的多克隆抗体,通过亲和层析对获得的抗血清进行了纯化,Western Blotting和免疫荧光分析显示:该纯化抗体能特异识别SMMC-7721细胞内源性表达的LPTS蛋白和外源性的HA-LPTS蛋白。上述结果表明我们获得了一特异性强、活性高的LPTS的多克隆抗体,可用于进一步对LPTS的功能研究。 LPTS binding-protein 2(LBP2)是我们实验室利用酵母双杂交筛选人脑cDNA文库分离出的一个LPTS的结合蛋白。为了深入研究LBP2的功能,我们克隆了LBP2基因,分别成功构建了LBP2的原核与真核表达质粒,纯化得到了6×His-LBP2、6×His-LBP2C689、GST—LBP2N712融合蛋白。用6×His-LBP2融合蛋白为抗原免疫家兔,获得了LBP2多克隆抗体。 免疫共沉淀和GST-Pulldown实验结果表明,LBP2在体外与体内均与LPTS蛋白相结合,进一步验证了酵母双杂交结果。利用荧光标记技术及免疫荧光检测表明:LBP2与LPTS在细胞内共定位,分布于核仁与端粒上。LBP2及其N端在体外可以抑制端粒酶活性(TRAP法分析),而其C端没有抑制活性。LBP2与端粒酶催化亚基hTERT在体内相互作用。 我们的实验结果表明LBP2是一个LPTS结合蛋白,在体外能抑制端粒酶活性,很可能参与端粒长度的调控。
其他文献
目的:通过研究子宫颈炎合并HPV感染的维医证型分布规律,HPV感染的相关因素,其在子宫颈炎合并HPV感染的维医辨证分型、诊疗及预防方面提供一定的帮助。方法:本课题采用病例对照的研究方法,根据纳入标准筛选子宫颈炎合并HPV阳性的120例患者作为病例组,同时根据病例对照研究方法的原则选取120例HPV阴性子宫颈炎患者作为对照组,两组均进行体液质分型,填写问卷调查表、研究对象的基本资料,使用SPSS 2
<正>第一条为全面贯彻党的十九大精神,认真落实党中央、国务院决策部署,加强水资源管理和保护,促进水资源节约与合理开发利用,根据《财政部国家税务总局关于全面推进资源税改
新生代员工的离职问题是人力资源管理者面临的巨大挑战之一,管理实践和理论研究的共同观点将此问题聚焦在工作价值观方面。本研究参考了已有文献中工作价值观的构成要素,并对
东北地区是指中国东北部的地理文化区和经济区,其中以辽宁省、吉林省、黑龙江省为主的地域称为“东三省”。东北地区是中华文化的发源地之一,其历史悠久,文化源远流长,早在距
<正>角膜塑形镜是种特殊的硬性角膜接触镜,通过过夜配戴使角膜中央区域变平坦而达到暂时降低近视的作用。塑形镜配戴后眼球的结构,特别是角膜形态的改变是明显。角膜的形态改
会议
目的:肺炎支原体感染在儿科呼吸道疾病中较为常见,易引发下呼吸道感染及发生肺外并发症。本文通过收集肺炎支原体感染所致大叶性肺炎及支气管肺炎的病例,对其血常规、炎症感染指标、免疫指标及临床症状进行分析,为临床早期区分肺炎支原体所致大叶性肺炎及支气管肺炎提供依据,并指导临床用药。方法:选取2018-01-01至2018-12-31在北部战区总医院和平分院确诊为肺炎支原体肺炎的患儿共69例,其中入院诊断为
近年来,自然语言处理(NLP)在人工智能领域发展的非常迅速,成为了计算机科学领域和人工智能产业发展中的一个重要方向。自然语言处理的研究目标主要是希望使人类和计算机之间
目的:探讨c-MYC与大肠癌血管生成的关系、可能机制及与临床病理特征间的关系。 方法:采用免疫组化S-P法对50例大肠癌组织,16例正常大肠组织标本的c-MYC、血管内皮生长因子(VE
近年来,我国经济社会快速发展,大众的科学素养不断提高,人们想通过旅游来增长知识和陶冶情操的愿望越来越强烈,而地学旅游为此提供了很好的平台。作为地学旅游的重要组成部分
在全球“汉语热”的大背景之下,越来越多的外籍人士开始学习汉语,汉语学习者的年龄结构也随之发生了一些变化。很多美国家庭选择让孩子从儿童时期开始学习汉语。因此,美国儿