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本研究主要探讨一种酵母菌染色体定点整合载体的构建方法及其实现染色体定点整合的可行性。参照SGD数据库提供的酵母菌全基因组序列信息，选取4号染色体上基因HEM13上游-750--2150bp处无基因活性的DNA序列作为基因定点整合的靶位点。在这1400bp的DNA序列中选取毫不重合的两部分，大小分别为744bp和602bp，作为整合载体的两个同源臂hom1和hom2。载体pUC18-INT4是本研究需要构建的目的载体，它的构建基础是本实验室已经构建的载体pUC18-RYUR。pUC18-INT4载体的构建是将两段同源臂hom1和hom2按照其在染色体上的位置和方向分别取代pUC18-RYUR上的两段repeat序列。由此，构建成了pUC18-INT4载体。
本试验使用酵母菌乙醇脱氢酶1(ADH1)基因作为验证pUC18-INT4载体实现基因定点整合的验证基因。用PCR方法扩增得到ADH1基因序列，利用限制性内切酶位点，使其连接在pUC18-INT4载体上，取代URA3序列，构建成pUC18-INT4-A载体。pUC18-INT4载体实现基因定点整合需要两个步骤，第一步：将pUC18-INT4载体转化URA3序列缺失的酵母菌株，涂布于省却尿嘧啶的培养基平板，利用选择标记基因URA3和PCR方法筛选出URA3序列正确整合的酵母菌株；第二步：将pUC18-INT4-A载体转化在第一步中实现URA3序列正确整合的酵母菌株，利用URA3基因编码的酶催化5-氟乳清酸(5-foa)产生细胞毒害物的特性和PCR方法筛选出实现ADH1基因正确整合的酵母菌株。由结果可知，用此方法构建的基因整合载体pUC18-INT4能够成功的实现基因在酵母菌中的染色体定点整合。