论文部分内容阅读
肺是生物机体重要的呼吸器官，肺的主要结构由肺内导管部(支气管树)和无数肺泡所组成。哺乳动物肺的发育通常描述为4个时期：假腺期、小管期、原始肺泡期和肺泡期。其原始肺泡期和肺泡期与肺泡的形成关系最为密切。我们之前通过抑制差减杂交筛选出一系列可能的肺泡发育相关调节基因，其中基因P311同时特异性高表达于原始肺泡期和肺泡期，因此我们推测该基因表达的蛋白P311在肺的发育中发挥着极为重要的作用。由于P311蛋白N端具有可与其他蛋白相互作用的PEST结构域，因此我们希望通过对其结合蛋白的筛选与研究，探知该基因在肺发育过程中的作用。我们利用酵母双杂交技术，构建小鼠肺组织cDNA文库，并以融合Gal4 DNA结合域(DNA binding domain，BD)的P311为诱饵蛋白筛选文库。通过将所得的432个酵母双杂交阳性克隆进行测序、排除假阳性蛋白及回复验证，并选择其中可能对肺发育具有潜在功能的基因，利用免疫共沉淀和双分子荧光互补等方法进行进一步验证。最终确定Galectin-1、SP—C、Loxl-1、Tenascin-XB、Fibrillin-2、Peroxiredoxin-1和SPARC等7个P311结合蛋白。进一步的研究发现，其中大部分基因在肺组织中具有有与P311相似的表达时序性特征，而在细胞中的表达亦可被P311上调。因此，这些结合蛋白可能与P311在肺发育中的作用密切相关，值得进一步深入研究。