论文部分内容阅读
犬布氏杆菌病(简称犬布病)是犬感染布氏杆菌后引起的一种传染性疾病,在犬舍中极易流行传播。我国近年来连续分离到犬种布氏杆菌,提示犬布病流行趋势逐渐上升。随着国内饲养宠物犬的家庭日益增多,犬布病的预防与控制也应得到更加密切的关注。本研究采用虎红平板凝集试验(Rose Bengal Plate Test, RBPT)和试管凝集试验(Standard tube Agglutination Test, SAT)调查了成都市及周边地区犬布病的流行情况,并初步建立了实时荧光定量PCR (Real-time PCR)快速检测方法。1.犬布氏杆菌病流行病学调查：本研究采集了成都市博爱动物医院门诊犬、金堂犬场和流浪犬的血清,共计1010份,分别使用光滑型和粗糙型RBPT对所有临床样本进行初步检测,阳性结果的血清再进一步使用光滑型和粗糙型SAT进行复检。结果显示,RBPT共检测出33份阳性血清,其中光滑型和粗糙型分别为14份和19份,光滑型和粗糙型RBPT阳性率分别为1.39%和1.88%,总RBPT阳性率为3.27%；SAT共检测出13份阳性血清,其中光滑型和粗糙型分别为1份和12份,光滑型和粗糙型SAT阳性率分别为0.10%和1.19%,总SAT阳性率为1.29%。本研究结果表明,流浪犬的布氏杆菌病阳性率最高,其次是犬场,而动物医院门诊犬的阳性率最低。2.布氏杆菌病Real-time PCR检测方法的建立：根据GenBank上提供的布氏杆菌属高度保守基因bcsp31设计一对特异性引物,以犬种布氏杆菌标准株RM6/66 bcsp31基因构建标准质粒pGM-T-bcsp31,并以此建立标准曲线。引物特异性结果表明,8种布氏杆菌标准菌株基因组DNA均扩增出198bp大小的片段,而对照菌株均呈阴性,说明建立的方法特异性好。从犬布氏杆菌病Real-time PCR检测方法的敏感性分析结果看出,普通PCR最低限度只能扩增10-2数量级浓度的DNA,而本次建立的Real-timePCR方法最低限度能够扩增10-4数量级浓度的DNA样本,灵敏度较普通PCR提高了100倍。对33份RBPT阳性血清进行Real-time PCR检测,其中10份呈阳性；对随机抽取的100份阴性血清进行Real-time PCR检测,6份呈阳性。本研究建立的Real-time PCR法能从阴性血清中检测出布氏杆菌,而对于RBPT阳性血清,检测结果与SAT检测结果有差异；两种方法均检测到成都地区犬布氏杆菌病。