论文部分内容阅读
[背景和目的]创伤失血性休克(Traumatic hemorrhagic shock,THS)发生率高、致死率高,临床治疗方法中包括外科止血和液体复苏(Resuscitation)等。急性肺损伤(acute lunginjury,ALI)是THS患者液体复苏后的重要并发症,其发生机制复杂。肺泡上皮细胞凋亡与之关系紧密,肺泡上皮细胞正常工作的前提是线粒体功能与结构完整,线粒体膜通透性改变可导致上皮细胞凋亡。研究证实,线粒体膜通透性主要由线粒体膜通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)调节。盐酸戊乙奎醚(penehyclidine hydrochloride,PHC)可以降低患者肺部并发症发生率,抑制内毒素所诱导的链式炎症级联反应,具有肺保护作用,但其作用机制尚未明确。本研究拟在创伤失血性休克/液体复苏相关ALI大鼠模型中,观察PHC干预对肺泡上皮细胞凋亡及mPTP开放程度的影响,探讨PHC的肺保护效应机制。[方法]实验动物选用40只体重200～300g雄性SD大鼠随机分为4组(n=10)。假手术组(sham组)仅接受气管切开和动静脉置管操作;其余三组模拟创伤失血性休克及液体复苏过程,shock组液体复苏前静注生理盐水2ml,PHC组液体复苏前静注2ml PHC(0.2mg/kg),atractyloside组复苏前静注1ml苍术苷(mPTP诱导开放剂,5mg/kg)及1ml PHC。复苏2小时后处死大鼠,取肺组织用Annexin V-FITC/PI双染色法及TUNEL法检测肺泡上皮细胞凋亡;用线粒体膜通透性转换孔检测试剂盒测定mPTP开放程度;用JC-1荧光探针标记线粒体膜电位(△φm);western blotting 法检测相关凋亡蛋白 Bax、Bcl-2、Caspase-3 以及 Cyt-c表达水平,并用PCR法检测相关凋亡蛋白mRNA表达水平;电子显微镜观察肺上皮细胞及线粒体超微结构变化。[结果]与sham组比较,shock组肺泡上皮细胞凋亡率显著升高(5.66%±2.27%vs 24.06%±5.02%,P<0.05);与 shock 组比较,PHC 组凋亡率显著降低(24.06%±5.02%vs 11.75%±3.60%,P<0.05);与 PHC 组比较,atractyloside 组凋亡率显著升高(11.75%±3.60%vs 20.13±13.51%,P<0.05)。shock 组 mPTP 开放程度显著增加,PHC组mPTP开放程度较shock组明显减少,atractyloside组开放程度明显大于PHC组(P<0.05)。shock组线粒体膜电位显著降低,PHC组膜电位下降幅度明显小于shock组,atractyloside组膜电位下降幅度较PHC组显著增大(P<0.05)。shock组Bcl-2蛋白和mRNA水平显著降低,Bax、Caspase-3和Cyt-c显著升高(P<0.05);与shock组比较,PHC组Bcl-2表达水平显著升高、Bax、Caspase-3 和 Cyt-c 水平显著降低(P<0.05);atractyloside 组 Bcl-2表达水平的下降幅度以及Bax、Caspase-3和Cyt-c的升高水平均显著大于PHC组(P<0.05)。电镜下sham组线粒体正常结构清晰可见,shock组线粒体肿胀,嵴消失,PHC组病理变化明显轻于shock组,atracyloside组镜下改变与shock组相似。[结论]创伤失血性休克/液体复苏相关急性肺损伤的病理生理机制与mPTP介导的肺泡上皮细胞凋亡有关。PHC可以抑制肺泡上皮细胞mPTP开放,减少细胞凋亡,从而发挥肺保护效应。