【摘 要】
：
目的:探索月腺大戟素A（Ebracteolatain A,EA）药物代谢动力学和组织分布,研究其抗乳腺癌作用的分子机制,以初步了解EA的成药性。方法:1.EA的药代动力学及组织分布研究:EA和内标厚朴酚通过甲醇蛋白质沉淀提取。色谱分离采用安捷伦Poroshell 120 EC-C18色谱柱,流动相为乙腈:0.1%甲酸水溶液（70:30,v/v）。质谱检测通过多反应监测（MRM）在负离子模式下进行。
论文部分内容阅读
目的:探索月腺大戟素A（Ebracteolatain A,EA）药物代谢动力学和组织分布,研究其抗乳腺癌作用的分子机制,以初步了解EA的成药性。方法:1.EA的药代动力学及组织分布研究:EA和内标厚朴酚通过甲醇蛋白质沉淀提取。色谱分离采用安捷伦Poroshell 120 EC-C18色谱柱,流动相为乙腈:0.1%甲酸水溶液（70:30,v/v）。质谱检测通过多反应监测（MRM）在负离子模式下进行。取适龄42只大鼠,以每组6只的标准,分成7组,每组分别静脉注射EA 5mg.kg-1,或腹腔注射EA 5、15、30mg.kg-1,或灌胃给予EA 25、50、100mg.kg-1。在静脉注射后0.02、0.08、0.17、0.33、0.5、1、2、4、6、8、12和24h,或腹腔注射后0、0.17、0.33、0.5、1、1.5、2、4、6、8、12和24h,或灌胃给药后0、0.25、0.5、1、2、3、4、5、6、8、12、24、36和48h,分别取血样测定药代动力学参数。另取大鼠30只,每个时间点6只,静脉注射EA 5mg.kg-1,分别在给药后5min、30min、2h、8h和24h取心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、小肠、子宫、卵巢和乳腺等组织标本,检测药物组织分布。2.基于转录组研究的EA抗乳腺癌作用机制分析:luminal A型乳腺癌细胞MCF-7细胞以EA进行干扰,取对照组和实验组各3个样本,采用二代高通量测序平台（Illumina Hi-Seq）测序技术分别对进行高通量转录组测序,观察和分析被干扰后的细胞与正常细胞基因表达差异。3.EA抗乳腺癌细胞作用的信号通路验证:在乳腺癌MCF-7细胞中添加不同浓度的EA,检测观察PKD1在蛋白水平的变化。构建并转染PKD1的过表达质粒,用实时荧光定量PCR和Western Blot检测药物对过表达细胞中PKD1的影响,并以Western Blot检测此时PKD1介导的相关信号通路中关键蛋白的表达。结果:1.EA药代动力学及组织分布研究:质谱检测EA的线性范围为2-2000 ng.ml-1,定量下限（Lower limit of quantitation LLOQ）为2 ng.ml-1。非房室模型药代动力学参数:腹腔注射给药5、15、30 mg.kg-1后,EA的绝对生物利用度分别为（27.23±21.36）%,（42.82±16.34）%和（40.13±29.99）%。灌胃给药25、50、100 mg·kg-1后,Ebracteolatain A的绝对生物利用度分别为（8.57±1.61）%,（7.36±5.30）%和（5.97±2.23）%。腹腔,口服给药AUC、CL、Vd表明,EA在大鼠体内吸收良好,其通过腹腔给药的绝对生物利用度大于口服。组织分布研究结果表明,静脉注射5 mg.kg-1后,EA广泛分布于心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、小肠、子宫、卵巢和乳腺。2.基于转录组研究的EA抗乳腺癌作用机制分析:对照组和实验组分别总获取了123,656,848和123,974,262个干净序列,分别对照到参考基因组上的序列数为119,762,214和119,881,622,各占总数的96.85%和96.69%;两组转录组相互对照可得:差异基因总数为1695个,其中包括上调基因770个,下调基因925个,其中可清楚注释的基因有3874个。GO（Gene Ontology GO）分析发现,这3874个基因主要涉及生物学过程（Biological process,BP）1270个、细胞组分（Cellular component,CC）1322个、以及分子功能（Molecular function,MF）1282个3个大类的45个小类,包括细胞的生长发育过程、信号蛋白活性、膜以及基因表达的调控等;KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes KEGG）分析发现差异表达基因涉及263条信号通路,主要代谢通路为PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路;以及心肌系统、碳水化合物代谢、和细胞生殖系统等生物过程。3.药效成分抗乳腺癌细胞作用信号通路验证:EA抑制乳腺癌细胞中PKD1蛋白的表达（P<0.05）,呈剂量依赖性。当转染过表达质粒后,PKD1在m RNA和蛋白水平上显著升高（P<0.001）。同时过表达PKD1显著恢复了EA对MCF-7增殖能力的抑制作用（P<0.001）。结论:1.建立了一种灵敏可靠的用于定量测定大鼠血浆和组织样品中EA的UPLC-MS/MS方法,阐明了EA在体内的药代动力学参数及组织分布情况。2.获取了EA对抗乳腺癌的可能影响信号通路。3.EA可能通过调控PKD1介导MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路抑制乳腺癌细胞增殖。
其他文献
目的:研究兔胫骨骨搬移延长过程中外周血骨形态发生蛋白2（Bone morphogenetic protein2,BMP2）和转化生长因子β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）的表达及其与搬移过程中骨再生的骨痂量相关性,探讨BMP2和TGF-β1作为监控指标调控搬移速度的可行性。方法:运用RauchF等的兔胫骨搬移延长方法稍加改良建立兔胫骨骨搬移延长动物模型
背景:骨肉瘤是通常发生在儿童和青少年中的危及生命的癌症之一。全世界骨肉瘤的发病率约为每百万新发病例3至4。尽管外科手术和新辅助化疗已获得了很大的发展,但临床上仍有大部分患者预后较差,即使在规范化化疗和原发病灶的根治性切除后仍有局部复发或肺转移的高风险,对于转移性疾病或肿瘤复发的患者,临床结果则更差。随着医学进步和发展,人们对骨肉瘤的认识也逐渐深入。骨肉瘤的进展过程极其复杂,因此,阐述骨肉瘤发生发展
研究背景及目的:骨稳态的维持与破骨细胞和成骨细胞之间功能的相互协调密切相关,破骨细胞具有吸收骨组织、调节骨量、参与骨重塑等功能,而骨形成、骨基质的矿化主要受成骨细胞调节,当破骨细胞过度活化或功能增强时将引起骨组织吸收增加,骨质被破坏,从而引起骨质疏松、骨关节炎、类风湿性关节炎等骨骼疾病,目前用于治疗这些疾病的药物虽然已开发出很多种,但长期使用不良反应较大,容易对机体造成损害,因此,急需开发出疗效确
目的:收集广西南宁一健康体检人群的数据资料,分析观察该体检人群的甲状腺疾病检出率、甲状腺功能状态及其与各体检指标之间的关系。资料与方法:选取2019年在广西医科大学第一附属医院体检部参加体检的人员中做了甲状腺功能测定的共1059人,其中进行了颈动脉内-中膜厚度测量的有263人。收集一般资料:性别、年龄、身高、体重、体质指数、收缩压、舒张压;实验室指标:TSH、FT3、FT4、SUA、TC、TG、H
研究目的:老年钙化性心脏瓣膜病（Senile calcified valvular heart dise ase,SCVD）是一种严重危害人类健康的疾病,主要表征为瓣膜结缔组织退行性病变、增厚及纤维化和钙化。随着人类寿命的延长,该病已成为影响和威胁老年人健康的一种独立的心脏疾病。SCVD患者在四个心脏瓣膜上都可出现钙化,但临床上主要表现为钙化性主动瓣膜病（Calcific aortic va lv
目的:本研究从计算生物学和胃癌临床样本两个角度分析胃癌组织中HER2表达水平对肿瘤免疫浸润的影响以及在肿瘤进展和全身炎症反应的临床意义,探索胃癌组织中HER2阳性表达是否影响肿瘤免疫浸润及其潜在的机制。材料与方法:（1）检索癌症与肿瘤基因图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库并下载胃癌组织中转录组RNA-seq数据以及蛋白组表达数据。对数据进行标准化处理后,利用胃癌
目的:SPC24是核分裂周期80（Nuclear Division Cycle 80,NDC80）复合物的亚基之一,它与其他三个蛋白（NUF2、NDC80和SPC25）共同参与了NDC80复合物的形成。NDC80复合物在NDC80-NUF2蛋白复合物的帮助下介导与纺锤体微管结合;SPC24-SPC25蛋白复合物将NDC80复合体锚定在内着丝点上,并且协调核纺锤体微管与动态的着丝点之间相互黏附,确保
目的:对比分析神经内镜与显微镜下经鼻蝶入路垂体腺瘤切除术的治疗效果,为垂体腺瘤病人手术方式的选择提供参考。方法:收集2018年02月至2020年02月在广西医科大学附属肿瘤医院神经外科实施经鼻蝶入路垂体腺瘤切除术的62例患者的临床资料,其中神经内镜下手术25例,显微镜下手术37例。对比两组病人的性别、年龄、头痛情况、视力减退情况、肿瘤大小、肿瘤分级情况等数据,比较两组病人术中出血量、术后感染率、手
目的:通过收集病例总结无正畸治疗史的短根畸形（Short Root Anomaly,SRA）患者的特点,了解该病的患病率和严重程度等情况;通过评估SRA患者正畸治疗后上颌中切牙的牙根吸收程度,探讨其发生正畸诱导的牙根尖外根吸收（Orthodontically induced external apical root resorption,OIEARR）情况及相关风险因素,为此类患者的正畸治疗提供参
目的:通过建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型模拟缺血性脑卒中,采用龙蛭汤、丁苯酞、内质网应激阻断剂等方法干预,观察龙蛭汤对模型大鼠神经功能评分、脑组织病理学变化、脑梗死体积、微血管密度计数以及GRP78、CHOP mRNA和蛋白表达的影响,从内质网应激角度探讨龙蛭汤促进脑缺血再灌注损伤后血管新生的作用机制。方法:（1）第一部分:24只SD大鼠随机分为4组,假手术组（生理盐水+假手术）、脑缺血再灌注24