第一部分人外周血单核细胞和T细胞的免疫磁珠分选以及纯度测定目的从人外周血中提取外周血单个核细胞(PBMC)、单核细胞(Monocytes）、T细胞，并检测其纯度。提取所有细胞中的胞浆蛋白与核蛋白，并检测其纯度。方法用Ficoll密度梯度法提取未孕女性16例、正常妊娠期女性23例、子痫前期患者16例外周血单个核细胞（PBMC），并用阴性筛选免疫磁珠分选PBMC中的单核细胞和T细胞。用流式细胞术检测PBMC、CD14+单核细胞、CD3+T细胞的纯度。用Western Blot检测所提取细胞浆蛋白与核蛋白的纯度。结果1. Ficoll法分离50ml外周血，得到PBMC，未孕女性组为1.24±0.36×108个/50ml，正常孕妇组为1.14±0.41×108个/50ml，子痫前期患者组为1.03±0.28×108个/50ml，三组间相比，差异无统计学意义（P>0.05）。2.使用免疫磁珠阴性分选技术，从PBMC中分离出单核细胞，未孕女性组单核细胞占PBMC比例为6.15±2.35%，正常孕妇组单核细胞占PBMC比例为6.74±2.54%，子痫前期组单核细胞占PBMC比例为8.93±3.19%。未孕组和正常孕妇组比，差异无统计学意义（P>0.05），正常孕妇组和子痫前期组相比差异有统计学意义（P<0.05），未孕组与子痫前期组比，差异有显著统计学意义（P<0.01）。3.使用免疫磁珠阴性分选技术，从PBMC中分离出的T细胞，未孕女性组T细胞占PBMC比例为33.83±15.61%，正常孕妇组T细胞占PBMC比例为32.64±9.447%，子痫前期组T细胞占PBMC比例为34.00±7.197%。三组间相比，差异无统计学意义（P>0.05）。4.单核细胞表面特异性标志为CD14分子，主要分布于PBMC中大细胞群体。CD14抗体染色并流式检测证实，本实验所获的单核细胞纯度在95%以上，符合后续实验所需的细胞纯度。5. T细胞表面特异性标志为CD3分子，主要分布于PBMC中的小细胞群体，即淋巴细胞群。CD3抗体染色并流式检测证实，我们所获T细胞纯度在99%以上，符合后续实验所需的细胞纯度。6.用Histone-H1和Tubulin同时标记细胞浆蛋白提取物与细胞核蛋白提取物。结果可见细胞核蛋白提取物中无Tubulin表达，而细胞浆蛋白提取物中无Histone-H1表达，说明胞浆蛋白与胞核蛋白的纯度均达到标准，无交叉污染。结论：所提取的单核细胞、T细胞以及其胞浆蛋白、核蛋白的纯度均符合实验要求，可以进行下一步实验。第二部分子痫前期中单核细胞与T细胞转录因子阵列筛选研究目的检测子痫前期患者外周血中提取的单核细胞和T细胞转录因子的变化，研究其在子痫前期发病机制中所起的作用，并筛选合适的目标因子进行进一步研究。方法从第一部分实验中得到的细胞核蛋白，使用转录因子微阵列测试，检测单核细胞和T细胞在子痫前期患者发病过程中所起的变化，筛选出在单核细胞中表达逐渐上升，同时在T细胞中表达逐渐降低的转录因子。结果1．在未刺激的单核细胞内，未孕女性组NFAT-1表达量为64560±3685，正常孕妇组NFAT-1表达量为89160±2338，子痫前期组NFAT-1表达量为103900±5204。NFAT-1在未刺激的单核细胞内的表达，从未孕、正常孕妇到子痫前期组，是逐渐上升且差异有统计学意义，（P<0.05）。2．在刺激后的单核细胞内，未孕女性组NFAT-1表达量为22640±4582，正常孕妇组NFAT-1表达量为63380±11690，子痫前期组NFAT-1表达量为86020±7218。NFAT-1在刺激后的单核细胞内的表达，从未孕、正常孕妇到子痫前期组，是逐渐上升且差异有显著的统计学意义（P<0.01）。3．在未刺激的T细胞内，未孕女性组NFAT-1表达量为92400±4473，正常孕妇组NFAT-1表达量为24050±1217，子痫前期组NFAT-1表达量为11550±3399。NFAT-1在未刺激的T细胞内的表达，从未孕、正常孕妇到子痫前期组，是逐渐下降且差异有显著统计学意义，（P<0.01）。4．在刺激后的T细胞内，未孕女性组NFAT-1表达量为82170±885.6，正常孕妇组NFAT-1表达量为45770±3097，子痫前期组NFAT-1表达量为31980±8096。NFAT-1在刺激后的T细胞内的表达，从未孕、正常孕妇到子痫前期组，是逐渐下降且差异有显著统计学意义的（P<0.01）。5.在未刺激的单核细胞内，未孕女性组GAS/ISRE表达量为2244±446.5，正常孕妇组GAS/ISRE表达量为43250±4087，子痫前期组GAS/ISRE表达量为83107±4702。GAS/ISRE在未刺激的单核细胞内的表达，从未孕、正常孕妇到子痫前期组，是逐渐上升且差异有显著统计学意义，（P<0.01）。6.在刺激后的单核细胞内，未孕女性组GAS/ISRE表达量为21220±2614，正常孕妇组GAS/ISRE表达量为37180±3837，子痫前期组GAS/ISRE表达量为42660±5754。GAS/ISRE在刺激后的单核细胞内的表达，从未孕、正常孕妇到子痫前期组，是逐渐上升且差异有显著的统计学意义（P<0.01）7.在未刺激的T细胞内，未孕女性组GAS/ISRE表达量为14350±2198，正常孕妇组GAS/ISRE表达量为6012±3167，子痫前期组GAS/ISRE表达量为5352±783。GAS/ISRE在未刺激的T细胞内的表达，从未孕、正常孕妇到子痫前期组，是逐渐下降且差异有显著统计学意义，（P<0.01）。8.在刺激后的T细胞内，未孕女性组GAS/ISRE表达量为40470±17596，正常孕妇组GAS/ISRE表达量为15680±3259，子痫前期组GAS/ISRE表达量为2348±194。GAS/ISRE在刺激后的T细胞内的表达，从未孕、正常孕妇到子痫前期组，是逐渐下降且差异有显著统计学意义的（P<0.01）。结论1.从未孕，正常妊娠到子痫前期的变化过程中，转录因子NFAT在单核细胞中表达逐渐上升。2.从未孕，正常妊娠到子痫前期的变化过程中，转录因子NFAT在T细胞中表达逐渐下降。3.从未孕，正常妊娠到子痫前期的变化过程中，转录因子GAS/ISRE在单核细胞中表达逐渐上升。4.从未孕，正常妊娠到子痫前期的变化过程中，转录因子GAS/ISRE在T细胞中表达逐渐下降。第三部分子痫前期患者外周血血浆在子痫前期发病机制中所起到的作用目的研究外周血血浆在子痫前期发病机制中所起到的作用。方法用Ficoll浓度梯度法提取6例正常女性外周血单个核细胞（PBMC），另取第一部分实验所得的未孕组、正常妊娠组、子痫前期组外周血血浆各10例，每组混合10例血浆，得到混合后血浆。将正常女性PBMC培养于不同混合后血浆中，共培养72小时，然后使用免疫磁珠阴性分选，得到纯净的单核细胞与T细胞。分为12组：1）单核细胞+未孕血浆+LPS刺激2）单核细胞+未孕血浆+对照物3）单核细胞+正常妊娠血浆+LPS刺激4）单核细胞+正常妊娠血浆+对照物5）单核细胞+子痫前期血浆+LPS刺激6）单核细胞+子痫前期血浆+对照物7） T细胞+未孕血浆+PMA/ionomycin刺激8）T细胞+未孕血浆+对照物9） T细胞+正常妊娠血浆+PMA/ionomycin刺激10）T细胞+正常妊娠血浆+对照物11） T细胞+子痫前期血浆+PMA/ionomycin刺激12）T细胞+子痫前期血浆+对照物。经药物刺激后再提取mRNA，用PCR检测其单核细胞TNF-αmRNA产物，以及T细胞的INF-γmRNA产物。结果1.未经刺激的正常女性外周血单核细胞，与子痫前期患者血浆共培养后，其TNF-αmRNA相对表达量为4.16±1.18，与未孕女性血浆以及正常妊娠血浆共培养后其相对表达量分别为0.712±0.132、3.278±1.037。差异有显著统计学意义（P<0.01）。刺激后的正常女性外周血单核细胞，在相同情况下的表达量分别为3.84±0.74、0.97±0.17、2.07±0.61，差异有显著统计学意义（P<0.01）。2.未经刺激的正常女性外周血T细胞，与子痫前期患者血浆共培养后，其INF-γmRNA相对表达量为0.53±0.08，而与未孕女性血浆以及正常妊娠血浆共培养后其相对表达量分别为2.66±0.245、1.77±0.21。差异有显著统计学意义（P<0.01）。结论1.子痫前期患者的血浆促使单核细胞产生更多的TNF-αmRNA，上调天然免疫的功能。2．子痫前期患者的血浆促使T细胞产生更多的INF-γmRNA，下调天然免疫的功能。第四部分动态血压监测预测子痫前期发病的相关性研究目的研究动态血压监测在判断子痫前期发病过程中的预测和诊断作用。方法采用动态血压仪，监测子痫前期患者50例，妊娠期高血压患者20例和正常妊娠女性20例的24小时动态血压监测结果，和临床各项指标，同时分析获得区分正常妊娠、妊娠高血压和子痫前期的各项动态血压监测指标的最适合界值点(cutoff值)。结果1.判断正常妊娠发展为妊娠期高血压疾病危险，及时预测疾病的发展情况，动态血压检测指标中的6项最有价值的指标依次为：平均24小时收缩压、平均白天收缩压、平均24小时平均动脉压、平均夜间收缩压、最大夜间收缩压和平均24小时舒张压。它们的切割值分别为131、132、94、128、130和85mmHg。其曲线下面积分别为0.901、0.891、0.888、0.877、0.874和0.871。2.判断妊娠期高血压发展为子痫前期的危险，及时预测疾病的发展情况，动态血压检测指标中的6项最有价值的指标依次为：平均夜间收缩压、最小夜间收缩压、平均24小时收缩压、平均24小时平均动脉压、平均24小时舒张压和最大24小时舒张压。它们的切割值分别为132、110、140、108、87和101mmHg。其曲线下面积分别为0.713、0.710、0.706、0.702、0.692和0.688。结论动态血压检测在判断正常妊娠发展为妊娠期高血压疾病，以及进一步发展为子痫前期的诊断价值得到肯定，其具体指标在判断子痫前期发病过程中的切割值具有一定的临床应用价值。