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目的：在特发性肺纤维化(IPF)过程中,起主要作用的TGF-β在炎症部位活性增强,使成纤维细胞大量增殖,导致严重肺纤维化,TGF-β通过Smads蛋白的信号转导及调控发挥作用。而Smad-3是介导TGF-β诱导肺纤维化的关键分子,其通过调节靶基因而影响IL-6家族特别是IL-31的表达,进一步影响JAKs/STATs通路,从而引起肺纤维化。这是肺纤维化可能的机制。因此,本项目旨在利用体外培养细胞及BLM诱导小鼠肺纤维化模型,得到TGF-β1-Smad-3-IL-31-JAKs/STATs这条通路,研究这条通路是肺纤维化的可能作用机制,以对肺纤维化的靶向治疗提供一定的线索。方法：将75只小鼠按随机数字表法分为3组。其中二组为博来霉素诱导肺纤维化模型组(气管内注射BLM5mg/kg0.1mL),分别为单纯造模组(BLM组,25只)、地塞米松治疗组(DXM组,25只)、每组25只；造模后1天,地塞米松组小鼠腹腔注射DXM5mg/kg1(0.1mL),每天1次,连续28天。另1组为正常对照组(NC组,25只)。给药第3、7、14、21、28天每组分别各处死5只小鼠。取肺组织行常规组织病理学观察；免疫组化检测肺组织中TGF-β1、Smad-3含量;RT-PCR法检测IL-31、STAT-1mRNA的表达量；Western blot测STAT-1蛋白含量；染色质免疫共沉淀(CHIP)实验检测Smad-2/3与IL-31启动子之间的结合联系。同时制得原代肺成纤维细胞,待培养3代后,抑制TGF-β表达,而对TGF-β表达的抑制,会下调Smad-3、IL-31的表达水平。对IL-31表达的降低,则会下调STAT-1的表达水平。同时查看肺成纤维细胞的形态,肺成纤维细胞的增殖特征,肺成纤维细胞的胶原合成；检测肺组织中羟基脯氨酸(HYP)含量。结果：(1)对小鼠肺初步肉眼观察和对肺组织病理学的观察,可发现由于BLM的诱导作用,BLM组小鼠的肺组织根据时间先后顺序出现由3天时的轻度肺泡炎到14天时纤维化的动态改变。DXM组也呈现类似的病理改变过程,但其程度较BLM组轻,但是,对比NC组,其程度却明显加重。NC组病理变化基本未见,没有明显的肺泡炎和纤维化改变。(2) TGF-β1在NC组肺组织有弱表达,在BLM组7天-14天表达达高峰,有统计学意义(p<0.01)。28天TGF-β1表达明显降低。DXM组7天-14天后的TGF-β1明显低于BLM组,地塞米松能够明显降低TGF-β1的表达。BLM组肺组织Smad3表达增强,第7天时明显高于NC组,随后下降,但直至第28天时BLM组中Smad3的表达仍明显高于NC组。DXM组小鼠各时间点肺组织Smad3表达水平均明显低于BLM组。(3)跟NC组相比,BLM组的IL-31及STAT-1mRNA从第7天开始升高,第14天达到高峰,后逐渐下降,但到28天仍高于NC组。有明显的统计学意义(p<0.05)。 DXM组小鼠各时间点肺组织IL-31及STAT-1mRNA表达水平明显低于实验组。经Western blot法检测STAT-1蛋白发现NC组小鼠肺内仅有少量STAT-1蛋白表达。BLM组小鼠的病变早期(第7天),肺组织中的STAT-1蛋白表达水平即增高,且随时间延长呈增高趋势,到第14天时达到高峰,第28天下降,差异有统计学意义(P<0.05)。DXM组也呈现类似的趋势,但比BLM组的表达明显减轻,有显著的统计学意义(P<0.05)。(4)用抗Smad-3抗体进行免疫沉淀蛋白质DNA交联复合物,用RT-PCR检测IL-31启动子,发现与NC组相比,BLM组的IL-31启动子明显增高。第21天达到高峰,到28天仍明显增高,有统计学意义(P<0.05)。(5)对TGF-β表达的抑制,则会下调Smad-3、IL-31的表达水平。(6)而对IL-31表达的降低,则会下调STAT-1的表达水平。(7)BLM组与NC对照组相比,肺组织中羟基脯氨酸含量第14天开始上升,第28天达到峰值(p<0.01)；DXM治疗组HYP含量于14-28天有明显下降(p<0.05)。结论：我们利用免疫组织化学、Western blot. RT-PCR及CHIP等方法对博来霉素诱导的肺纤维化模型中TGF-β1、Smad-3、IL-31、STAT-1的表达水平进行了检测,发现这四者在一定程度上,具有表达水平共同升高或者降低的趋势,而CHIP的使用,则进一步证明了前人并没有证明的Smad-3通过与Il-31的结合而诱发下游JAK/STAT通路激活的作用。