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目的肺炎链球菌荚膜(Capsule CPS)是肺炎链球菌的一种重要的毒力因子,在细菌定植、粘附中发挥重要作用,可保护细菌免受宿主的吞噬杀伤作用。肺炎链球菌荚膜合成基因为一操纵子结构,即cps基因座,其表达水平受其上游启动子的调控,但目前尚不清楚有哪些蛋白可通过该启动子调控这些基因及CPS的合成。我们前期研究通过DNA pulldown实验筛选到CcpA可能与肺炎链球菌荚膜多糖(CPS)基因座启动子区域结合,且CcpA(catabolite control protein A, CcpA)是一种与糖代谢相关的转录调控因子,调控了肺炎链球菌多种基因的表达。本研究拟通过EMSA实验验证CcpA与cps启动子序列的结合,并进一步研究其对荚膜的调控作用,为了解肺炎链球菌荚膜合成的分子机制提供新的实验证据。方法利用大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)工程菌原核表达CcpA蛋白,使用Ni2+亲和层析的方法纯化目的蛋白。利用纯化后的CcpA蛋白免疫昆明小鼠并制备多克隆抗体；采用ELISA法测定抗CcpA抗体效价。随后,利用Westertn blot方法分析CcpA蛋白在肺炎链球菌中的保守性。另外,利用EMSA方法分析CcpA与cps基因座启动子区域片段的结合。最后,采用基因重组方法构建ccpA基因缺失株和ccpA基因回复株；利用ELISA法测定野生D39菌株、ccpA基因缺失株和ccpA基因回复株的荚膜多糖含量。结果首先得到了高纯度(>90%)的CcpA重组蛋白且制备了CcpA多克隆抗体,Western blot结果显示CcpA蛋白在多种血清型的肺炎链球菌均有表达。EMSA实验结果显示,CcpA蛋白可与cps基因座启动子区域结合,且呈剂量依赖性；ccpA基因缺失时,细菌CPS含量升高,回复表达CcpA蛋白后,CPS含量显著降低。结论我们的结果表明,CcpA是肺炎链球菌中一种保守表达的蛋白,可通过与cps基因座启动子特异性结合而负性调控肺炎链球菌荚膜多糖的表达。