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本研究针对植物病毒病害,初步研究了抗病毒农用抗生素SN03,并对其防治效果、发酵条件、分离纯化工艺和作用机理进行了研究,结果如下:
1.链霉菌菌株Streptomyces1123发酵液对TMV有很好的防治效果,对植物病原真菌和细菌有很好的抑菌作用,抑菌谱较广。研究结果表明,发酵液在心叶烟上对TMV有很好的预防和钝化作用,钝化10min和提前24h喷施发酵液可有效降低TMV的侵染,枯斑抑制率高达93.88%和87.93%,对TMV侵染后也有一定的治疗作用;发酵液对引起根部、叶斑类和苗期病害的20种病原菌均有较好的抑制作用,其中,对烟草黑胫病菌(Phytophthoraparasiticavar.nicotianae)和黄瓜菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorum)的抑菌圈直径达50.36mm和56.26mm。
2.链霉菌菌株Streptomyces1123摇瓶发酵的最佳碳源为可溶性淀粉,最佳氮源为花生饼粉,摇瓶发酵的最佳培养基组成为(%):可溶性淀粉4,花生饼粉2,硫酸铵0.2,碳酸钙0.8,氯化钠0.8。摇瓶发酵最佳条件为:斜面菌龄培养时间为5d~10d、接种量为8%~12%,培养基起始pH值4.0~6.0,发酵温度28℃~30℃,装液量30mL/250mL三角瓶,转速160r/min~200r/min,发酵培养时间为96h。研究还表明,该菌株在发酵过程中对磷酸盐有较强的适应力,磷酸盐含量在0.01%~0.04%范围内对农抗SN03的产生基本无抑制作用。加入适量的硫酸锰可明显提高SN03产量,而硫酸铜和硫酸锌则抑制抗生素SN03的产生。
3.农抗SN03为水溶碱性核苷类抗生素,对光、热、酸碱性都有较好的稳定性,对紫外线的稳定性稍差一些。通过DiaionHP20大孔树脂和732强酸性阳离子树脂的吸附交换,薄层层析,SephadexLH-20葡聚糖凝胶分离和无水乙醇沉淀可得到农抗SN03粗提品。研究结果表明,农抗SN03在捷克八溶剂系统中的纸层析图谱与庆丰霉素、云南霉素等十分相似,因此可初步推断其为水溶抗生素;pH纸层析和纸电泳结果表明农抗SN03含有碱性或弱碱性的活性组分;其紫外吸收图谱表明,农抗SN03属于核苷类抗生素。
4.农抗SN03对病毒粒子有明显的体外钝化作用,对TMV在心叶烟上的扩展有一定的抑制作用,钝化30min后,对病毒粒子的结构有一定程度的破坏作用。通过分光光度计法和生物测定法,比较了处理和对照植株体内的病毒浓度,结果表明经SN03处理的植株,其体内病毒浓度明显低于对照。对寄主诱导抗性的研究表明,农抗SN03对PAL的诱导作用明显,使该酶活性在第4d~6d时达到高峰;对POD活性测定表明,农抗SN03在第8d和第12d诱导酶活升高,诱导作用明显。对CAT和PPO活性测定表明,农抗SN03对这两种酶活性的诱导作用不是很明显。