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本课题应用免疫组织化学技术(immunohistochemistry, IHC)和原位杂交技术(In situ hybridization,ISH)检测喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma, LSCC)组织和正常喉黏膜组织中骨桥蛋白(osteopontin, OPN)、细胞黏附分子CD44拼接变异体6(adhesion molecules CD44splice variant6, CD44v6)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达,探讨OPN、CD44v6、MMP-9mRNA及其蛋白在正常喉黏膜组织和喉鳞状细胞癌组织中的表达及与患者临床病理特征的关系；探讨OP、CD44v6、MMP-9mRNA及其蛋白在喉鳞状细胞癌组织中表达的相互关系。采用免疫组织化学技术和原位杂交技术方法检测47例喉鳞癌组织,10例正常的喉黏膜组织中OPN、CD44v6、MMP-9mRNA及其蛋白的表达情况；分析三个指标与患者的年龄、性别、分型、分化程度、TNM分期及淋巴结转移的关系以及三者之间表达的关系；分析两种方法检测OPN、CD44v6、MMP-9表达的一致性。OPN、CD44v6、MMP-9蛋白在47例喉鳞癌组织中的阳性表达率分别为63.8%(30/47)、76.6%(36/47)、68.1%(32/47)；10例正常喉黏膜组织中的阳性率分别为：10%(1/10)、30%(3/10)、0%(0/10),喉鳞癌组织中OPN、CD44v6、MMP-9蛋白的阳性表达率明显高于正常喉黏膜组织中的表达率,差异显著(P<0.05)。OPN、CD44v6蛋白在喉鳞癌组织中高表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关,OPN、CD44v6蛋白与年龄、性别及肿瘤位置等临床病理学特征无明显关系；MMP-9蛋白在喉鳞癌组织中高表达与TNM分期、淋巴结转移相关,MMP-9蛋白与患者年龄、性别、肿瘤位置、分化程度无明显关系。在47例喉鳞癌组织标本中OPN、CD44v6、MMP-9蛋白阳性表达分别为30例、36例、32例,在OPN蛋白阳性表达30例中CD44v6蛋白阳性表达27例,MMP-9蛋白阳性表达24例,经Spearman相关分析,结果显示：OPN蛋白与CD44v6蛋白两者表达呈显著正相关；OPN蛋白与MMP-9蛋白两者表达呈显著正相关；CD44v6蛋白与MMP-9蛋白两者表达呈显著正相关。OPN、CD44v6、MMP-9mRNA在47例喉鳞癌组织中的阳性表达率分别为61.7%(29/47)、72.3%(34/47)、66%(31/47)；10例正常喉黏膜组织中的阳性率分别为10%(1/10)、30%(3/10)、0%(0/10),喉鳞癌组织中OPN、CD44v6、MMP-9mRNA的阳性表达率明显高于正常喉黏膜组织中的表达率,差异显著(P<0.05)。 OPN、CD44v6mRNA在喉鳞癌组织中高表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关；OP、CD44v6mRNA与年龄、性别及肿瘤位置等临床病理学特征无明显关系；MMP-9mRNA在喉鳞癌组织中高表达与TNM分期、淋巴结转移相关,MMP-9mRNA与患者年龄、性别、肿瘤位置、分化程度无明显关系。在47例喉鳞癌组织标本中OPN. CD44v6、MMP-9mRNA阳性表达分别为29例、34例、31例,在OPN mRNA阳性表达29例中CD44v6mRNA阳性表达26例,MMP-9mRNA阳性表达24例,经Spearman相关分析,结果显示：OPN mRNA与CD44v6mRNA两者表达呈显著正相关；OPN mRNA与MMP-9mRNA两者表达呈显著正相关；CD44v6mRNA与MMP-9mRNA两者表达呈显著正相关。在47例喉鳞癌组织标本中,OPN蛋白阳性表达为30例,在30例OPN蛋白阳性标本中OPN mRNA阳性29例；CD44v6蛋白阳性表达为36例,在36例CD44v6蛋白阳性标本中CD44v6mRNA阳性34例；MMP-9蛋白阳性表达为32例,在32例MMP-9蛋白阳性标本中MMP-9mRNA阳性31例,经Kappa检验分析,p均小于0.01,说明两种方法具有高度的一致性。OPN、CD44v6、MMP-9在喉鳞癌组织中的阳性表达率明显高于在正常喉黏膜组织中的阳性表达率,提示OPN、CD44v6、MMP-9可能与喉鳞癌的发生发展有关；OPN、CD44v6、MMP-9在免疫组化和原位杂交两种方法检测中具有高度的一致性；免疫组化及原位杂交均证明OPN、CD44v6、MMP-9在有淋巴结转移的原发性喉鳞癌组织中的表达明显高于无淋巴结转移组,提示OPN、CD44v6、MMP-9与喉鳞癌的转移有关；OPN、CD44v6、MMP-9表达的水平均与肿瘤浸润的范围成正相关,提示OPN与喉鳞癌浸润有关；等级相关分析显示,CD44v6、MMP-9的表达均与OPN有显著相关性,提示三者可能在喉鳞癌的侵袭转移中起协同作用,OPN表达增加可能使得CD44v6和MMP-9表达上调,导致癌细胞的侵袭转移。联合检测OPN、CD44v6和MMP-9对预测肿瘤早期转移和预后有重要意义,OPN将来可能成为喉鳞癌靶向治疗的一个新靶点。