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玉屏风多糖(YuPingFeng polysaccharides,YPF-P)为玉屏风散有效部位群,具有增强机体免疫、抗病毒、防治肝损伤等作用,但目前多糖的质量控制标准并不完善(仅检测总糖含量),致使一些假、劣的多糖产品屡屡出现。本试验通过对YPF-P、黄芪多糖、白术多糖、防风多糖进行提取和纯化及总糖含量测定,采用高效凝胶色谱(HPLC-GPC)法测定分子量大小,薄层色谱(TLC)法及柱前衍生化HPLC法进行单糖组成种类和物质的量比的测定,二甲基噻唑(MTT)法对多糖作用后的鸡胚成纤维细胞(CEF)体外增殖能力测定,初步建立了系统、快捷、有效的YPF-P及其组方多糖的质量控制方法。研究内容如下:(1)水提醇沉提取多糖,AB-8大孔树脂纯化,用苯酚-硫酸法对纯化后的多糖进行总糖含量测定。(2)HPLC-GPC法,示差折光检测器(RID)测定多糖的分子量,流动相:超纯水;流速:0.7 mL/min;柱温:35℃。(3)薄层色谱(TLC)法测定多糖的单糖组成,使用硅胶G板二次展开,105℃显色45 min。(4)柱前衍生化HPLC法检测多糖的单糖组成。各多糖样品用三氟乙酸溶液水解,然后用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化,经C18色谱柱分离,以磷酸盐缓冲溶液-乙腈(85:15)洗脱,柱温40℃;流速1.0 mL/min;进样量20μL检测波长254 nm。(5)MTT法对多糖作用后的CEF体外增殖能力测定。从倍比稀释的YPF-P溶液中优选出最佳浓度,然后用最佳浓度对4种多糖进行比较试验。结果显示:(1)提取纯化后多糖样品含量均达到90%以上。(2)经HPLC-GPC法测定,YPF-P、黄芪多糖、白术多糖中75%以上为1300<Mw<5000的小分子多糖;防风多糖中Mw≈20000000的大分子多糖占比60%。(3)经TLC法检测,4种多糖均含有果糖、D-葡萄糖、D-甘露糖、阿拉伯糖、D-半乳糖。(4)经柱前衍生化HPLC法检测,YPF-P与防风多糖均由D-甘露糖、D-核糖、鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、阿拉伯糖7种单糖组成,其物质的量比分别为:4.64:1:5.88:2.40:120:42.9:69.5;6.17:1:4.73:4.12:202:80.2:68.9。黄芪多糖与白术多糖均由D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、阿拉伯糖4种单糖组成,其物质的量比分别为1:388:17.5:14.7;1:239:18.6:19.3。(5)经MTT法检测,YPF-P的15.63-1000μg/mL各浓度的试验组均有显著促进CEF增殖的作用,其中1000μg/mL浓度组促进增值的效果最明显。4种多糖对CEF的增殖促进作用大小顺序为YPF-P>黄芪多糖>白术多糖>防风多糖。试验结果表明采用的多糖提取纯化方法稳定,多糖含量及生物活性高,所建立的多糖分子量检测、单糖组成、生物活性分析方法快捷、高效、稳定、可靠。本试验为制定YPF-P及其组方多糖的质量控制标准提供了重要的基础数据,也为多糖质量控制方法研究提供了参考和借鉴。