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模式识别受体(PRRs)在先天免疫中起着不可替代的作用,通过识别各种“自已”和“非已”成分,把这种信息传导给下游的效应分子,有的模式识别受体可以直接发挥功能,清除异已成分。清道夫受体(SRs)和C-型凝集素(CTLs)都是模式识别受体中非常重要的成员,本研究选取日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)为实验动物,研究了一种B类清道夫受体MjSR-B1和一个含有卷曲螺旋结构域的C-型凝集素MjcLec在先天免疫中的作用。1.日本囊对虾B类清道夫受体MjSR-B1的功能研究清道夫受体通过识别病原相关分子模式(PAMPs)参与先天免疫,同时通过识别损伤相关分子模式(DAMPs)参与疾病的发生。虽然在脊椎动物中清道夫受体已经得到深入研究,但是它们在无脊椎动物先天免疫中的作用仍需要进一步阐明。我们从日本囊对虾中鉴定出一种B类清道夫受体,命名为MjSR-B1。 MjSR-B1主要分布在血细胞、心脏、肝胰腺中,在受到鳗弧菌和金黄色葡萄球菌刺激以后,对虾血细胞中的MjSR-B1的mRNA表达水平上调。MjSR-B1胞外结构域的重组蛋白rMjSR-B1可以凝集革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,凝集作用依赖于钙离子,同时rMjSR-B1可以结合脂多糖和脂磷壁酸。RNA干扰敲降MjSR-B1以后,日本囊对虾对鳗弧菌和金黄色葡萄球菌的清除作用和吞噬作用都显著下降,几个吞噬相关基因的表达水平也下调,包括肌球蛋白Myosin，小GTP酶Rab5(Ras related protein),溶酶体相关膜蛋白Lamp1(Lysosomal-associated membrane protein 1)和肌动蛋白相关蛋白Arp(Actin-related protein)。同时抗菌肽的表达水平也下调,包括甲壳肽和抗脂多糖因子。过表达MjSR-B1以后,细菌清除能力增强,吞噬率上升,吞噬相关基因和抗菌肽的表达量都上调。然而,过表达缺少碳末端胞内片段的突变体MjSR-B1ΔC却没有上述结果。我们的结果表明,MjSR-B1可以通过促进吞噬和增强抗菌肽的表达参与对虾的抗细菌免疫。2.含有螺旋卷曲螺旋结构域的C-型凝集素MjcLec参与日本囊对虾的先天免疫C-型凝集素家族是一类模式识别受体,在免疫系统中发挥着重要的作用,然而它在无脊椎动物先天免疫中的作用还需要进一步研究。我们从日本囊对虾中鉴定出一种新型的C-型凝集素,命名为MjcLec。MjcLec包括一个信号肽、一个螺旋卷曲螺旋结构域和一个糖识别结构域。组织分布实验显示MjcLec在所有组织中都有表达,WSSV和细菌刺激都能诱导MjcLec的表达。体外实验表明重组表达的MjcLec可以通过结合多糖来识别细菌进而凝集细菌。利用RNA 干扰技术敲降对虾体内MjcLec的表达,会促进WSSV的复制并且抑制甲壳肽的表达。这些数据表明MjcLec参与了对虾抗病毒和抗细菌的先天免疫。