现有研究表明柿单宁具有清除自由基、抗氧化、抑制肿瘤、降血脂等多种生理活性,但其构效关系尚不明确。由于柿单宁结构较为复杂,因此研究其特征结构单元对于其活性的贡献有助于阐明其构效关系。目前对于柿单宁特征结构单元制备主要采用凝胶色谱柱法和高效液相色谱法,存在制备量小,效率低等问题。本文研究了中压制备液相色谱纯化柿单宁特征结构单元的工艺条件,并对其在的小鼠体内的代谢动力学以及代谢产物进行了分析,旨在为阐明柿单宁的生物活性和构效关系提供参考。1.采用中压液相色谱制备柿单宁特征结构单元以柿单宁为原料,甲醇和水作为流动相,采用中压液相色谱快速制备系统和Flash column C18色谱柱(20-35μm,60?)初步分离纯化两种柿单宁特征结构单元,然后利用半制备高效液相色谱进一步提高两种二聚体的纯度并制备收集,最后通过高效液相色谱-质谱联用(LC-MS)对其进行结构解析和确认,得到了纯度分别为97.2%和95.4%的A型EGCG二聚体和A型ECG二聚体。2.柿单宁特征结构单元的体内药代学实验利用5%的吐温80对超滤膜进行预处理,降低超滤膜与药物之间的非特异性吸附,最终测定A型EGCG二聚体的血浆蛋白结合率为88.02%-92.49%,A型ECG二聚体的血浆蛋白结合率为93.35%-96.46%。柿单宁特征结构单元表现出一定的浓度依赖效应,随着药物浓度增加,血浆蛋白结合率也有一定程度的增大,并且A型ECG二聚体的血浆蛋白结合率稍大于A型EGCG二聚体。考虑到两种二聚体血浆蛋白结合率较高,我们首先利用EGCG单体建立了一套简单、快捷、准确的血浆样品前处理药代学方法,并验证了该方法对两种A型二聚体的适用性。通过Pksolver软件分析了小鼠静脉注射剂量为50mg/kg的A型两种二聚体时的药代学参数,小鼠静脉注射A型EGCG和ECG二聚体的半衰期t1/2分别为120.54min和37.41min,血浆浓度最高时间Tmax均为5min,血浆中二聚体的最大浓度Cmax为32.56μg/m L和55.05μg/m L,药时曲线下面积AUC(0-t)分别为1949.42μg/m L*min和2112.48μg/m L*min,平均滞留时间MRT分别为170.11min和40.38min,两种A型二聚体在小鼠体内存留时间短,代谢消除速度较快,作用时间较短。3.柿单宁特征结构单元的血浆、尿液代谢产物分析采用高分辨率质谱对两种二聚体在小鼠体内的代谢产物进行了分析。结果表明,A型EGCG和ECG二聚体均能在血浆和尿液样本中检测到。两种二聚体均先经历QM反应,形成相应单体之后继续生成衍生化代谢产物。其中,小鼠尿液中能够检测到更多种类的代谢产物,以小分子的酚酸为主,也有硫酸酯化和葡萄糖醛酸化产物存在,而小鼠血浆中则主要是硫酸酯化和葡萄糖醛酸化产物。