雌二醇对雌性家兔十二指肠肌电活动作用的机制研究

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雌激素(Estrogen)是一类具有广泛生物学活性的卵巢激素,不仅能促进雌性卵巢、子宫、输卵管及阴道等生殖器官的发育并维持雌性第二性征,也参与了对消化、呼吸、心血管等系统的功能活动的调节。雌激素对胃肠运动具有十分明显的调节作用,但资料报道的调节的效应并不完全一致。那么雌激素对十二指肠运动有怎样的调节作用呢?本试验采用双重免疫荧光标记方法检测雌激素受体ERα、ERβ与胆碱能递质受体M2mAChR在雌性家兔十二指肠的表达与分布情况,并运用BL-420F生物机能试验系统观察并分析苯甲酸雌二醇分别与胆碱能受体激动剂(氯化氨甲酰胆碱)以及拮抗剂(硫酸阿托品)对卵巢摘除家兔十二指肠肌电活动的影响,同时对所得到的数据进行数学模型构建,系统地阐述雌激素与乙酰胆碱对十二指肠运动调控的交互作用关系。本试验获得如下主要结果:  1.免疫荧光双重标记结果显示:ERα,ERβ分别与M2mAChR在雌性家兔十二指肠内存在荧光双标产物。其中 ERα 与 M2mAChR 的双标阳性产物主要分布于十二指肠的黏膜层、黏膜下层,少量分布于肌层。而 ERβ 与 M2mAChR 的双标阳性产物主要分布于十二指肠的黏膜层及黏膜下层。  2.内源性卵巢激素对十二指肠肌电活动影响的试验表明,卵巢摘除组以及卵巢摘除+ ICI187280 组家兔十二指肠平滑肌电活动的振幅、频率以及肌电活动指数均显著低于未进行卵巢摘除的对照组(P<0.01);卵巢摘除组与卵巢摘除+ICI187280 组的上述监测指标均无显著性差异(P>0.05),表明在进行雌激素对雌性家兔十二指肠运动影响的研究时应通过卵巢摘除排除内源性卵巢激素对实验结果产生的影响。  3.在卵巢摘除后给予不同剂量的苯甲酸雌二醇处理,十二指肠肌电的振幅、频率与肌电活动指数均随苯甲酸雌二醇剂量的增加呈现出一种先升高后降低的变化趋势。通过对各监测指标进行分析筛选构建了雌二醇剂量与肌电活动指数关系的函数模型,其表达式为:y= 1.50 + 3.73 × exp{-0.5 × [(x–0.098)/ 0.035 ]2},其中y代表肌电活动指数,x代表苯甲酸雌二醇剂量。对该函数进行分析后可知,肌电活动指数的变化范围为 1.50 mV·min-1~ 5.23 mV·min-1,并在雌二醇剂量为0.098 mg·kg-1时肌电活动指数达到最大值5.23 mV·min-1。此外,以雌二醇剂量分别为0.063 mg·kg-1、0.098 mg·kg-1、0.133 mg·kg-1为分界点,将肌电活动指数随雌二醇剂量增加而变化的趋势分为指数型增加、对数型增加、指数型减小以及对数型减小四个区间段。  4.在给予经不同剂量苯甲酸雌二醇处理的卵巢摘除家兔硫酸阿托品处理以完全阻断胆碱能神经对消化道的神经支配后,十二指肠肌电活动的振幅、频率及肌电活动指数均被强烈抑制,并且雌激素对十二指肠肌电活动的浓度依赖性调节作用也消失。而在给予经不同剂量苯甲酸雌二醇处理的卵巢摘除家兔氯化氨甲酰胆碱处理以增强胆碱能神经对消化道的神经支配后,在任意一个剂量的氯化氨甲酰胆碱作用下,雌激素均又表现对十二指肠肌电活动的浓度依赖性调节特性。通过构建不同剂量氯化氨甲酰胆碱与苯甲酸雌二醇剂量关系的数学模型并结合苯甲酸雌二醇单因素作用下所构建的函数分析比较各函数相同位置参数的特点,推导出了苯甲酸雌二醇与氯化氨甲酰胆碱联合作用,其表达式为:f(x,y)=5.11/ { 1+ exp[-52.84 × (y–0.016) ] }+ [ 3.82 + 2.40 × exp{-exp[-(y–0.042)/ 0.008 ]–(y–0.042)/ 0.008 + 1 }] × exp{-0.5 × [(x–0.098)/ 0.034 ]2},其中f(x,y)代表肌电活动指数,x 代表苯甲酸雌二醇剂量,y 代表氯化氨甲酰胆碱剂量。由该函数可知,苯甲酸雌二醇在不同氯化氨甲酰胆碱作用下对肌电活动指数影响的最高点所对应苯甲酸雌二醇剂量以及拐点剂量不变,即在不同剂量氯化氨甲酰胆碱作用下,依然可将肌电活动指数随雌二醇剂量增加而变化的趋势以苯甲酸雌二醇剂量分别为 0.063 mg·kg-1、0.098 mg·kg-1、0.133 mg·kg-1为分界点,分为连续的指数型增加、对数型增加、指数型减小以及对数型减小4个区间段。而苯甲酸雌二醇对十二指肠肌电活动指数作用的最低值以及对十二指肠肌电活动指数变化量作用的峰值则在氯化氨甲酰胆碱剂量的上升过程中不断变化,其中前者随着氯化氨甲酰胆碱作用的增强而不断增加;而后者以氯化氨甲酰胆碱剂量为0.042 mg·kg-1作为分界点,随氯化氨甲酰胆碱剂量的上升经历一个先增大后减小的过程。  以上研究结果表明,雌激素对十二指肠运动的影响是通过作用于支配十二指肠的胆碱能神经这一间接途径完成的,从而证明雌激素可通过作用于支配内脏活动的神经反射弧间接调节内脏器官的功能活动。
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