本文利用我所国家种质-镇江桑树圃保存的遗传类型丰富的桑种质资源，采用RAPD分子标记技术，对桑属植物的遗传多样性进行研究，试图从分子水平对它们的系统发育、亲缘关系进行探讨。在对桑属种质资源基因组叶绿体DNA提取研究基础上，开展了叶绿体DNA克隆研究，同时对叶绿体DNA的trnL-trnF间隔区序列进行了研究，从基因水平开展桑属植物的进化分析。并首次对桑树的线粒体基因组DNA进行了研究。一、桑树DNA提取方法的确立 通过改进SDS和CTAB提取DNA的方法，对不同的桑树材料进行了DNA的提取。结果表明2种方法都获得了高质量的DNA，并进一步指出CTAB法特别适合高糖、酚类化合物高以及作品氧化程度高的材料。二、桑属种质资源的RAPD研究 用RAPD技术对桑属12个种3个变种的44份材料和构属的1份材料基因组DNA进行了多态性分析，在优化的反应条件下，用筛选出的24个随机引物扩增，共得到113条清晰稳定的多态性片段，多态性达72.0％，表明材料间有较丰富的遗传多样性。统计这些片段，根据Nei遗传相似系数和遗传距离，然后用UPGMA法进行分析，构建了45份材料间的系统树，并进一步探讨了材料间的亲缘关系。三、桑树叶绿体基因组DNA的提取及部分序列分析 用改良的Milligan法提取了桑树叶绿体基因组DNA（cpDNA）。用特异性引物，从cpDNA基因组扩增出tRNF-tRNL基因。用随机引物对同一种桑基因组DNA及cpDNA进行RAPD分析，实验表明提取的DNA是具有相当纯度的cpDNA。进一步用XbaI和HindⅢ对cpDNA进行了酶切和克隆。通过质粒DNA的酶切鉴定，已克隆到5个片段，对其中一片段的700bp序列进行了分析，推测克隆的片段可能为trnK基因的内含子。 四、桑树叶绿体DNA的tnlL．tnlr间隔区序列分析 设计桑树tnll．－tmF间隔区序列的特异引物，扩增出了桑属育刀二和桑 莲的该序列，它们的长度分别为414hp和417hp。该序列富含A／T，而且在 tmL－tmF中存在［d（AT）／d（TA）］重复序歹。桑属育＊－1和桑莲 trnLtrnF 间隔区序列有 421个分析性状，具有 17个变异位点，在这些变异中主要以 碱基的插入和缺夫（主要是插入／缺夫“）为进化形式，其余的发生了少数 置换。除了这些变异位点，其余该昔酸序列完全相同，说明两者有高度同 源性，与桑科、菊科和蔷蔽科trnL－trnF间隔区序列有一定同源性。用Clustalx 软件对 ZI份材抖的 tmL《 基因间隔区序列进行聚类分折，建立了系统进 化发育树。为桑树的起源、进化以及桑属的系统发筒提供了基因水平上的 证据。 五、桑属线粒体基因组DNA的提取 本文对植物的mtDNA制备方法进行了改进，首次提取了桑属种质线粒 体基因组DNA。利用该法提取的桑树线粒体基因组DNA，其纯度能满足限 制性酶切及IL＼PD分折的要求。