【摘 要】
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目的:研究活性氧(ROS)在酒精刺激引起的肺动脉平滑肌细胞内钙离子浓度[Ca2+]_i升高的机制和作用以及慢性酒精刺激引起肺动脉高压的机制。方法:原代培养SD大鼠的肺动脉平滑肌细胞(PASMC);培养剔除线粒体DNA的肺动脉平滑肌细胞;特异性质粒转染肺动脉平滑肌细胞;用H_2-DCFDA荧光探针和共聚焦显微镜检测PASMC内活性氧的生成;用Fura-2/AM荧光探针和共聚焦显微镜测量PASMC内钙
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目的:研究活性氧(ROS)在酒精刺激引起的肺动脉平滑肌细胞内钙离子浓度[Ca2+]i升高的机制和作用以及慢性酒精刺激引起肺动脉高压的机制。方法:原代培养SD大鼠的肺动脉平滑肌细胞(PASMC);培养剔除线粒体DNA的肺动脉平滑肌细胞;特异性质粒转染肺动脉平滑肌细胞;用H2-DCFDA荧光探针和共聚焦显微镜检测PASMC内活性氧的生成;用Fura-2/AM荧光探针和共聚焦显微镜测量PASMC内钙离子浓度的变化;用Lieber-DeCarli饲料构建SD大鼠酒精模型;对模型动物进行血流动力学的测量。结果:(1)、酒精刺激引起的[Ca2+]i升高可被线粒体DNA剔除所抑制;(2)、酒精刺激可使肺动脉平滑肌细胞内产生的活性氧(ROS)增多,并且随着酒精浓度的升高细胞内ROS生成增加;(3)、用外源性H2O2模拟,酒精诱导PASMCs产生的ROS相当于23.46μM的H2O2刺激产生的活性氧;(4)、酒精刺激诱导产生的活性氧是线粒体源性;(5)、23.46μM H2O2刺激肺动脉平滑肌细胞能引起[Ca2+]i升高,并且可被钙敏感受体(CaSR)的特异性抑制剂Calhex231和CaSR shRNA所抑制;(6)、用PEG-catalase预处理后可抑制酒精刺激引起的[Ca2+]i升高,说明酒精刺激细胞的活性氧主要成分是过氧化氢;(7)、用CaSR基因敲除SD大鼠构建慢性酒精中毒模型,CaSR基因敲除可抑制酒精诱导的肺动脉高压。结论:酒精刺激可使肺动脉平滑肌细胞内线粒体源性的活性氧生成增加,并且活性氧的主要成分为过氧化氢,增多的过氧化氢通过钙敏感受体使细胞内钙离子浓度升高;敲除钙敏感受体可抑制酒精刺激引起的肺动脉高压。
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