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目的:研究LncRNA-408和其靶基因LIMK1对人乳腺癌细胞的迁移能力的影响及其相关分子机制。方法:(1)通过生物信息学分析并筛选人乳腺癌细胞MCF-7发生EMT转变前后有差异的LncRNA,qRT-PCR方法验证其在细胞内表达量和LncRNA-408在临床样本中表达。(2)qRT-PCR方法检测不同乳腺癌细胞系中LncRNA-408的表达量;用慢病毒转染BT549和HS578T建立LncRNA-408敲低的细胞系,用慢病毒转染MCF-7和SKBr-3建立LncRNA-408过表达的细胞系;用划痕实验和Transwell细胞迁移实验检测各组细胞迁移能力。(3)分别提取细胞核、细胞浆RNA,qRT-PCR检测LncRNA-408在人乳腺癌细胞中的核浆表达情况;qRT-PCR检测LncRAN-408敲低/过表达组中靶microRNAs表达情况;qRT-PCR检测转染了miRNA-654-5p的NC/mimics的HS578T和NC/inhibitor的MCF-7中LncRNA-408的表达情况;qRT-PCR检测LncRNA-408敲低/过表达组中LIMK1的表达情况;qRT-PCR检测转染了miRNA-654-5p的NC/mimics的HS578T和NC/inhibitor的MCF-7中LIMK1的表达情况;WB方法检测各处理组细胞中LIMK1的蛋白表达情况;qRT-PCR检测30例临床标本中LIMK1与Lnc-408 RNA水平表达的相关性;荧光素酶报告实验分别验证LncRNA-408与miR-654-5p,miR-654-5p与LIMK1之间的结合关系。(4)查询LIMK1高/低表达组的乳腺癌患者生存分析;qRT-PCR检测LIMK1在乳腺癌患者标本中的表达水平;qRT-PCR检测LIMK1敲低/过表达组细胞内mRNA表达情况;WB检测各组组细胞内LIMK1,p-cofilin和cofilin的蛋白表达情况;用罗丹明标记鬼笔环肽对各组细胞进行染色;用Transwell细胞迁移实验检测各组细胞迁移能力。(5)qRT-PCR检测LncRNA-408和LIMK1在HS578T(scramble sh+veh oe/Lnc-408 sh+veh oe/Lnc-408 sh+LIMK1 oe)和MCF-7(veh oe+scramble sh/Lnc-408 oe+scramble sh/Lnc-408oe+LIMK1 sh)各组细胞中的表达水平;WB检测各组组细胞内LIMK1,p-cofilin和cofilin的蛋白表达情况;用罗丹明标记鬼笔环肽对各组细胞进行染色;用Transwell细胞迁移实验检测各组细胞迁移能力。结果:(1)LncRNA-408在EMT化的乳腺癌细胞中高表达;LncRNA-408在淋巴结转移阳性患者(N=19)的标本中表达水平明显高于阴性患者(N=11),表达水平随着乳腺癌分级水平的提高而增高,随着乳腺癌分期的提高而增高。(2)LncRNA-408表达水平随着人乳腺癌细胞恶性程度增强而升高;成功建立LncRNA-408敲低的BT549和HS578T细胞系,LncRNA-408过表达的MCF-7和SKBr-3细胞系;LncRNA-408敲低后细胞的迁移能力明显减弱,过表达后细胞的迁移能力明显增强。(3)LncRNA-408主要分布于乳腺癌细胞胞质中;miR-654-5p的表达量随LncRNA-408敲低或过表达而升高或下降;LncRNA-408的表达量随miR-654-5p过表达或敲低而降低或升高;LIMK1的表达量(RNA/蛋白)随LncRNA-408敲低或过表达而出现下降或升高,随miR-654-5p过表达或敲低而下降或提高;LncRNA-408与LIMK1在乳腺癌患者标本的RNA表达水平呈正相关;荧光素酶报告实验验证LncRNA-408与miR-654-5p有结合关系,miR-654-5p与LIMK1有结合关系。(4)LIMK1与乳腺癌的不良预后有关;LIMK1的表达水平在淋巴结转移阳性患者(N=19)的标本中明显高于阴性患者(N=11),在Ⅱ期(N=10)和Ⅲ期(N=14)中均明显高于Ⅰ期(N=6),在G2级(N=13)和G3级(N=9)中的均明显高于G1级(N=8);成功建立LIMK1敲低的HS578T和过表达的MCF-7细胞系;p-cofilin的表达量随着LIMK1的敲低或过表达而下降或升高;乳腺癌细胞骨架随着LIMK1的敲低或过表达而削弱变弥散或变得稳固;乳腺癌细胞迁移能力随着LIMK1的敲低或过表达而减弱或增强。(5)成功建立LncR NA-408敲低+LIMK1过表达的HS578T和LncRNA-408过表达+LIMK1敲低的MCF-7细胞系;p-cofilin的表达量随着LIMK1的变化而变化;乳腺癌细胞骨架状态和迁移能力均随着LIMK1表达水平的回复而回复。结论:(1)LncRNA-408的高表达与人乳腺癌侵袭转移相关;(2)LncRNA-408促进人乳腺癌细胞迁移;(3)LncRNA-408调控Lim结构域激酶1(LIMK1)的表达;(4)LIMK1通过p-cofilin/F-actin促进乳腺癌细胞迁移;(5)LncRNA-408通过促进LIMK1的表达调控人乳腺癌细胞的迁移能力。