目的:乳腺癌严重威胁着女性的健康。肿瘤的免疫治疗已经成为热点,三阴性乳腺癌由于其高免疫细胞浸润和PDL1的表达,使免疫治疗成为其潜在的治疗手段。因此,我们设计了一种具有靶向功能的三特异性抗体CD3-TROP2-PDL1,并在体外检测其对三阴性乳腺癌细胞的治疗效果,以便为开发出新的三阴性乳腺癌免疫治疗手段带来思路。方法:1.我们通过将TROP2-sc Fv片段分别和CD3与PDL1单抗的重链进行连接,随后通过哺乳动物细胞进行表达,最后纯化出三特异性抗体。2.得到抗体后,我们利用考马斯亮蓝染色法,检测了抗体的分子量以及单体结构大小。3.利用流式细胞术,选择了仅表达一种靶抗原的细胞,检测了抗体与其靶抗原阳性细胞的结合能力。4.利用荧光报告基因系统,检测了抗体分别在存在肿瘤细胞和不存在肿瘤细胞的情况下对Jurkat细胞的激活能力。5.通过分选出Pan-T细胞与肿瘤细胞加抗体共培养,利用CCK8法检测了抗体介导的T细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。6.利用ELISA法检测了Pan-T与肿瘤细胞加药共培养的上清中IL-2的分泌量。结果:我们成功得到了正确构型的三特异性抗体,通过考马斯亮蓝染色法发现,抗体的分子量在190k Da左右,打开二硫键后发现抗体实际由一对轻链和一对连接了TROP2-sc Fv的重链组成。从流式细胞术的结果来看,抗体可以与相应的靶抗原良好结合。荧光报告基因的结果证实,抗体在存在肿瘤细胞的情况下可以有效激活Jurkat细胞。CCK8和ELISA结果显示,三特异性抗体不仅可以有效引导T细胞清除肿瘤细胞,还可刺激T细胞分泌细胞因子IL-2。结论:三特异性抗体CD3-TROP2-PDL1可以良好地与其靶抗原结合,能有效激活Jurkat细胞,并介导Pan-T细胞杀伤乳腺癌细胞,同时刺激T细胞分泌出细胞因子IL-2。此款抗体可以为开发三阴性乳腺癌的治疗性抗体提供新思路。