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山慈菇为兰科植物杜鹃兰Cremastra appendiculata（D.Don）Makino、独蒜兰Pleione bulbocodioides（Franch.）Rolfe或者云南独蒜兰Pleione yunnanensis Rolfe的干燥假鳞茎,前者习称“毛慈菇”,后二者习称“冰球子”。山慈菇归肝、脾经,具有清热解毒、化痰散结、善消燥痰的功效。杜鹃兰,兰科杜鹃兰属植物,分布于我国黄河流域至西南、华南等地,主产四川、贵州等地。独蒜兰,兰科独蒜兰属植物,假球茎狭卵形或长颈瓶形,分布于中国长江流域及以南的广大地区。云南独蒜兰,兰科独蒜兰属植物,同独蒜兰相似,假鳞茎瓶状,分布于云南、四川西部、贵州等地。近年来,国内国外相继报道了山慈菇的抗肿瘤活性的研究,但仍未发现其具体的活性成分所在,为进一步阐明其抗肿瘤活性成分,本论文利用UNIFI天然产物解析平台、顶空-固相微萃取（Headspace solid-phase microextraction,HS-SPME）与气相色谱-质谱联用（Gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）联用技术,以及FTIR（Fourier Transform Infrared spectoscopy,FTIR）与HPLC（High Performance Liquid Chromatography）联合建立指纹图谱的研究方式,对山慈菇化学物质进行了较为深入的研究,同时在体内体外分别对其抗肝癌活性的研究进行了初步的探索,取得了以下创新性成果:（一）山慈菇的化学成分研究1、山慈菇化学成分的LC-MS分析与鉴定采用超高效液相-四极杆飞行时间质谱（Ultra performance liquid chromatogra-phy Quadrupole-time of flight mass spectrometry,UPLC-Q/TOF-MS）结合UNIFI天然产物解析平台,首次对山慈菇乙酸乙酯层提取物中小分子化学成分（分子量为100～1500 Da）进行了快速分析与鉴定。结果显示山慈菇乙酸乙酯层提取物中富含多种结构类型的成分。通过与对照品比对,或通过精确分子量和典型碎片分析,鉴定了93种化合物。结构类型包括菲类、苯丙素类、联苄类、甾醇和萜类等,以菲类和苯丙素类成分为主。研究为阐明山慈菇的化学组成提供了新的思路和理论基础。2、山慈菇指纹图谱及化学模式识别研究首次联合应用FTIR和HPLC建立指纹图谱对16个不同产地的山慈菇进行分析,通过共有峰率和变异峰率对红外谱图进行双指标序列分析,采用spss 22.0对HPLC指纹图谱中15个共有峰进行主成分分析和聚类分析。为山慈菇的质量控制提供一种有效的方法,用以控制临床用药质量。3、山慈菇中挥发油的测定采用顶空-固相微萃取与气相色谱-质谱联用联用技术,首次测定了山慈菇药材中的挥发性成分,共分离鉴定出72种挥发性成分,包含烷烃类、酮类、醇酚类、有机酸类、酯类等,占总挥发性成分的85.57%,相对质量分数超过1%的有15种,其中相对质量分数较高的有醋酸Acetic acid（24.95%）,丁酸Butanoic acid（19.23%）,占总成分的44.18%。本研究填补该药材挥发性物质的这一片研究空白,为其进一步开发探究提供参考依据。（二）山慈菇抗肝癌的活性研究1、山慈菇各萃取层对肝癌Hep G2细胞的影响本研究采用CCK-8法评价了山慈菇提取物各萃取层对于Hep G2细胞活力的影响。结果表明,山慈菇总提取物对Hep G2细胞活力具有一定的抑制作用。其中,山慈菇乙酸乙酯萃取物可以显著降低Hep G2细胞存活率,而山慈菇正丁醇萃取物和石油醚萃取物对于Hep G2细胞存活率无明显作用。2、山慈菇乙酸乙酯萃取物抑制肝癌Hep G2细胞的增殖本节通过Hoechst33258核染色、流式细胞术和Western blot等实验方法证实了山慈菇乙酸乙酯萃取物可以提高Hep G2细胞中Cleaved Caspse-3蛋白表达和BAX/BCL-2蛋白比值,促进Hep G2细胞凋亡,阻滞细胞周期。这种作用可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路实现的。3、山慈菇乙酸乙酯萃取物对H22荷瘤小鼠的影响本研究首次评价了山慈菇乙酸乙酯萃取物对于H22荷瘤小鼠肿瘤及其肝功能的影响。结果表明,山慈菇乙酸乙酯萃取物可呈剂量依赖性地抑制肿瘤生长、增加IL-2含量、减少TNF-α和VEGF含量,提示山慈菇乙酸乙酯萃取物可能通过提高免疫能力、抑制肿瘤血管生成而发挥抗肝癌的作用;同时,山慈菇乙酸乙酯萃取物可显著回调荷瘤小鼠血清中ALT、AST含量,提示山慈菇乙酸乙酯萃取物可缓解荷瘤小鼠的肝组织损伤。