脑血管疾病(CVD)是神经系统的常见病和多发病,严重威胁着人类的生命健康。缺血性脑损伤可致选择性和迟发性的CA1区锥体神经元凋亡,导致动物和人类的认知缺失。大部分CVD存活者遗留不同程度的认知障碍,给社会和家庭带来沉重负担。女性在绝经期前发生脑卒中的风险较同龄男性低,但绝经后其脑卒中的发病率与同龄男性相仿,雌激素替代疗法可降低绝经期妇女脑卒中发生的风险,大量基础及临床实验证实,雌激素(E2)具有神经保护作用。雌激素是一种甾体类固醇激素,由卵巢和肾上腺分泌,其神经保护作用机制包括经典的受体依赖机制和受体非依赖机制。其中,与靶器官中的雌激素受体结合是其在脑内最主要的作用途径,通常认为雌激素进入细胞后与其受体结合,受体蛋白发生构型变化后,与DNA的性激素作用元件结合,调节相关基因表达,产生不同效应。在脑内,雌激素主要通过其两种受体ERα和ERβ来发挥作用。目前认为在雌性动物中,雌激素主要通过脑内的ERα受体发挥作用;而有关雌激素对雄性动物的受体作用机制目前学术界存在争论。一部分学者认为在雄性小鼠的全脑缺血模型中,ERβ受体介导了雌激素的神经作用,而另一部分学者则持不同观点。因此,性别因素对雌激素神经保护作用的影响是一个值得研究的问题。有实验表明,在全脑缺血模型中,雌激素可改善雌性大鼠的认知功能障碍。然而,在临床上,局灶性脑缺血的发病率要远远大于全脑缺血,而且因缺血方式的差异,神经元的凋亡路径不同,其认知功能结局也相差甚远;再者,中风疾病的发展预后具有性别差异性,对雌性动物有效的药物未必能够应用于雄性动物。因此,研究雌激素在局灶性脑缺血模型中的认知保护作用及其性别差异,具有重要的理论意义和临床应用价值。研究目的本实验将健康成年SD大鼠按性别配对分组,阻断其单侧大脑中动脉后给予雌激素治疗,观察大鼠缺血后的神经功能评分、脑梗死体积比、雌激素受体ERα和ERβ的表达情况及行为学变化,探讨雌激素的神经保护和认知保护作用的性别差异,并分析其可能机制。研究方法1、动物模型制备采用改良Longa法制作大脑中动脉闭塞模型,根据实验需要在一定的缺血时间(1.5h)后行拔线再灌注,以获得实验所需的MCAO模型。2、TTC染色使用TTC染色的方面结合计算机图像分析软件计算梗死区脑组织的面积。3、免疫组织化学在形态学上观察雌激素受体ERα和ERβ表达的部位,对蛋白表达情况进行定性分析。4、RT-PCR结合内参相对定量分析缺血后大鼠脑内ERα和ERβ蛋白mRNA的表达。5、Morris水迷宫实验用于检测大鼠在局灶性脑缺血后的认知恢复状况,评价其空间学习和空间记忆能力。6、统计学处理数据以均数±标准差( x±s)表示,多组样本均数的比较采用方差分析,两样本均数比较采用t检验。采用SPSS 17.0统计软件分析,以P≤0.05为差异有统计学意义。结果实验结果显示,雌激素对成年SD大鼠的局灶性脑缺血损伤具有神经保护和认知修复作用;成年雌性去卵巢大鼠脑缺血24h时,雌激素受体ERα蛋白和mRNA的表达显著增加;在成年雄性大鼠,ERβ蛋白和mRNA的表达增加。在局灶性脑缺血后的2周,雌激素治疗组大鼠在定位航行实验和空间探索实验中均取得了较好成绩;雌激素可提高雄性大鼠的空间学习与记忆能力,但对于雌性大鼠,雌激素仅能部分改善其空间学习能力,不能提高其空间记忆能力。实验结果提示,雌激素受体途径的差异可能是其神经保护和认知修复作用的性别差异的原因。