结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tuberculosis)是对人类破坏性极大的病原菌之一,严重威胁着人类的生命健康。对细菌而言,DNA的复制起始是其生长繁殖最基本的一步,对M tuberculosis也是非常关键的,目前关于其DNA复制起始的机制仍不清楚。DnaA作为一种重要的复制起始蛋白,在DNA的复制起始阶段发挥至关重要的作用。因此,对DNA复制相关元件进行研究将有助于我们揭示此病原菌独特的DNA复制调控机制,从而有利于找到新的潜在药物靶标。本研究从M.复制起始蛋白DnaA出发,对M.tuberculosis H37Rv基因文库进行筛选。结果发现DnaA与DnbM蛋白之间存在相互作用。本实验室通过一系列实验发现DnbM是一个DNA结合蛋白,是可能的拟核蛋白。我们对这一相互作用进行了深入研究。具体研究成果如下:(1)通过双杂交实验发现DnaA与DnbM蛋白之间存在相互作用,即DnaA通过其C端结构域与DnbM的N端结构域相互作用。(2)SPR、Pull-down实验进一步证实了 DnbM与DnaA蛋白之间在物理上的相互作用。(3)Co-IP实验更进一步证明了在M.tuberculosis体内DnbM与DnaA之间也是存在相互作用的。(4)最后,我们证实了 DnbM蛋白通过与DnaA相互作用而抑制DnaA的DNA结合活性。综上所述,我们证实了 DnaA蛋白与DnbM蛋白之间的相互作用,并深入研究了复制起始因子DnaA、oriC与DNA结合蛋白DnbM之间的相互作用和调控关系。本课题的研究成果有助于我们进一步理解M tuberculosis DNA的复制机制,从而为结核病的治疗提供新的线索。