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目的1.采用兔骨髓组织,通过梯度离心法获取骨髓基质细胞,在体外培养传代,观察该细胞的生物学特性及成骨能力。2.研究新型多孔超聚消旋聚乳酸(PDLLA)支架材料的体外细胞相容性,探讨制备负载BMP及VEGF的PDLLA支架材料可行性。3.评价同时负载BMP及VEGF的PDLLA支架材料的体内成骨能力,进行兔桡骨缺损的修复试验并探讨在动物体内成骨的量效关系,以得到一种较好的可吸收骨构建材料。方法1.抽取新西兰兔骨髓,用全骨髓培养法获取单核细胞,经条件培养液体外诱导、扩增。通过倒置相差显微镜、细胞染色、扫描电镜观察细胞生长及细胞与材料的附着情况,并绘制细胞生长曲线(MTT法)检测各组细胞增殖和细胞周期变化情况。采用碱性磷酸酶染色(ALP)和Ⅰ型胶原免疫组化染色进行骨髓基质细胞成骨特性的鉴定。2.贴壁法培养兔骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs),经体外矿化诱导培养、扩增后,与实验组A(含5mgBMP与100μgVEGF微球PDLLA)、实验组B(活性玻璃陶瓷材料BGC)及对照组(空白PDLLA)分别进行体外复合培养；并通过定性及定量检测细胞在材料表面的粘附能力、增殖活力,验证细胞材料复合体的成骨活性,比较分析各组支架材料之间的差异。3.制备新西兰大白兔右挠骨中段12mm骨缺损实验模型,随机分为实验组、对照组和空白组,实验组植入同时负载5mgBMP、VEGF微球及1X106个已向成骨细胞诱导的BMSCs的PDLLA、对照组植入负载5mgBMP及1X106个已向成骨细胞诱导的BMSCs的PDLLA,空白组仅制作骨缺损模型,不植入任何成骨材料。术后对动物进行大体观察、摄X线片观察各组不同时相骨缺损修复情况、比较不同时相的骨缺损区X线阻射密度、并于术后第4,8,12周取出骨缺损区标本进行大体观察和组织学切片观察,图像分析骨小梁的生数量,并取第12周标本进行生物力学检测。结果1.兔骨髓基质细胞经条件培养液体外诱导、扩增,骨髓基质细胞ALP染色阳性率超过80%,体外培养的细胞能合成较多量Ⅰ型胶原,均表明所获得的骨髓基质细胞是成熟的成骨细胞,可以做为骨组织工程中一种良好的种子细胞。2.兔BMSCs在三组支架材料的表面均能生长,经体外诱导后在支架材料的表面形成钙结节,实验组A与B细胞的粘附及增殖能力均强于对照组(P<0.05)3.负载BMP及VEGF的PDLLA支架材料12周三点折弯强度为(52.38±2.56)MPa,纯PDLLA为(29.83±3.14)MPa,相比差异有显著性(P<0.01),负载BMP及VEGF的PDLLA与PDLLA在术后各时期骨形成评分高于对照组(p<0.01).结论1.所获得的骨髓基质细胞是成熟的成骨细胞,可以做为骨组织工程中一种良好的种子细胞。2.兔BMSCs与新型多孔PDLLA支架材料有良好的细胞相容性,可作为骨缺损的组织工程材料。3.负载BMP及VEGF的PDLLA支架材料具有良好的生物相容性和可吸收性,修复兔挠骨12mm骨缺损的效果明显优于单纯负载BMP的PDLLA支架材料,是一种有临床应用前景的骨移植材料。