目的:阐明Notch信号在转化生长因子(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)诱导的心肌成纤维细胞(Cardiac fibroblasts,CFs)向肌成纤维细胞转化(FMT)中的作用以及氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)的干预作用;证实氧化苦参碱调控Notch信号抑制TGF-β1诱导的FMT。方法:取出生1-3天SD大鼠乳鼠心脏经胰蛋白酶消化法以及差速贴壁法获得原代CFs,通过波形蛋白免疫细胞化学法鉴定CFs纯度;传代培养后采用2代CFs进行实验。通过MTT法观察TGF-β1诱导CFs增殖的浓度及时间效应,以及OMT与Notch信号通路抑制剂DAPT对TGF-β1诱导CFs增殖的抑制作用。TGF-β1诱导CFs增殖的浓度效应分为空白对照组(Control,无血清DMEM)和TGF-β1模型组,TGF-β1的浓度分为1ng/mL,2.5ng/mL,5ng/mL,10ng/mL,20ng/mL,30ng/mL。TGF-β1诱导CFs增殖的时间效应分为Control组,模型组TGF-β1(10ng/mL),作用时间分为12h和24h。OMT对TGF-β1诱导CFs增殖抑制作用分为Control组,TGF-β1组(10ng/mL),OMT组浓度分为0.001mg/mL,0.005mg/mL,0.01mg/mL,0.02mg/mL,0.04mg/mL,0.05mg/mL。Notch信号通路抑制剂DAPT对TGF-β1诱导CFs增殖抑制作用分为Control组,TGF-β1组(10ng/mL),DAPT浓度分为1μmol/L,5μmol/L,10μmol/L。之后将实验分为五组,即Control组,TGF-β1组(10ng/mL),DAPT组(1μmol/L),OMT低剂量组(OMT-L,0.005mg/mL),OMT高剂量组(OMT-H,0.01mg/mL),各组CFs的形态学变化由HE染色显示;苦味酸天狼星红染色观察各组胶原纤维沉积;免疫荧光染色检测各组中肌成纤维细胞标志蛋白α-SMA的表达情况;划痕实验观察各组CFs的迁移情况;羟脯氨酸含量测定检测各组中胶原分泌物羟脯氨酸的变化;流式细胞周期测定各组CFs在各细胞周期的分布比例。通过Western blot检测Notch信号通路中受体蛋白Notch-1,配体蛋白Jagged-1,DLL-4以及靶蛋白Hes-1的表达情况,实验分为Control组,TGF-β1组(10ng/mL),DAPT组(1μmol/L),OMT-L组(0.005mg/mL),OMT-H组(0.01mg/mL),OMT-L+DAPT组,OMT-H+DAPT组。结果:MTT结果显示,TGF-β1(10ng/mL)作用CFs 24 h后,与空白组相比(p<0.01)。经OMT高低剂量以及DAPT预处理后,可显著抑制CFs增殖(p<0.01)。HE染色结果显示各组中细胞核被染为蓝紫色,胞浆被染为粉红色,与Control组相比,TGF-β1组细胞数量明显增多,且双核细胞数增加,与TGF-β1组相比,OMT高低剂量组与DAPT组中细胞间因个数的减少使得间隙增大。苦味酸天狼猩红染色结果显示,TGF-β1组与Control组相比,胶原纤维显著增加,与TGF-β1组相比,OMT低、高剂量和DAPT组细胞数量减少,胶原纤维显著降低。免疫荧光染色显示,绿色荧光代表α-SMA,细胞核被DAPI染为蓝色荧光,TGF-β1组与Control组相比,α-SMA绿色荧光显著增加,与TGF-β1组相比,OMT低、高剂量和DAPT组细胞数量减少,绿色荧光显著降低。划痕实验结果表明,TGF-β1组与Control组相比,细胞的迁移能力显著增加,与TGF-β1组相比,OMT低、高剂量和DAPT组细胞的迁移能力显著降低。羟脯氨酸含量检测结果显示,TGF-β1组与Control组相比,细胞培养液上清中的羟脯氨酸含量显著上升,与TGF-β1组相比,OMT低、高剂量和DAPT组中羟脯氨酸含量显著降低。流式细胞周期结果显示,TGF-β1组与Control组相比,G1期细胞分布比率减少,S期的细胞分布比率显著增加,与TGF-β1组相比,OMT低、高剂量和DAPT组,G1期细胞分布比率增加,S期细胞比率减少。Western blot结果显示,与Control组相比,TGF-β1作用后,Notch信号通路中受体蛋白Notch-1,配体蛋白Jagged-1,DLL-4以及靶蛋白Hes-1的表达显著增加,与TGF-β1组相比,OMT低、高剂量和DAPT组中各蛋白的表达均显著降低,而OMT+DAPT组与DAPT组相比,各蛋白之间的表达无显著的差异。结论:结果证实OMT抑制Notch信号可以改善TGF-β1诱导FMT过程中CFs的增殖,分化和胶原合成的增加。进一步的体内研究将提供它更多的在心血管疾病上的作用。