雄烯二酮(AD)是制备甾体激素类药物的重要中间体，可通过微生物选择性切除植物甾醇侧链制得。微生物法制取AD具有产品纯度高、生产成本低、周期短等特点，但也存在菌种转化能力普遍不高，底物甾醇在水中溶解度低等缺点。针对上述问题，本文通过诱变育种筛选出一株．AD高产突变株分枝杆菌Mycobacterium sp．BD696-6，显著提高了AD产量和转化率，并且以有机相一水相两液相培养系统作为发酵系统，明显提高了甾体底物的投料量。同时，研究了培养基组成以及发酵条件对转化的影响。 研究的主要结论有： (1)采用紫外线诱变、硫酸二乙酯诱变以及两者复合诱变方法对分枝杆菌Mycobacterium sp.BD696进行诱变，筛选得到一株AD高产突变株分枝杆菌Mycobacterium sp.BD696-6，在甾醇添加量为6‰时，AD浓度最终达到2.33g/L，AD转化率为61.4％，比出发菌株提高13.5％。连续传代5次，生产稳定性良好。 (2)通过单因素实验和正交实验，确定两相系统中有机相葵花油最佳添加浓度为20％，水相培养基最佳C、N、P源以及金属离子种类和浓度分别为：糖蜜6％，NH<,4>NO<,3> 0.3％，(NH<,4>)<,2>HPO<,4> 0.08％，FeSO<,4>·7H<,2>O 0.05 g/L，ZnSO<,4>·7H<,2>O 0.3g/L，MgSO<,4>·7H<,2>O 0.2 g/L在最佳培养基条件下以及甾醇添加量为6960时，AD转化率达到84.0％，比原培养基条件下的转化率提高了22.4％。 (3)通过单因素实验，确定了摇瓶发酵阶段的最适发酵条件是：液体种子培养时间66h，接种量12％，装液量50mL/250mL三角瓶，摇床转速220rpm，温度30～32℃，初始pH7.5。 (4)在5L发酵罐中进行的放大培养试验验证了摇瓶发酵的高转化率。AD的转化率随着甾醇添加量的提高而有所降低，但总产量明显提高。甾醇添加量在8％0时，AD转化率在108h达到最高97.1％，此时产量为4.92g/L；甾醇添加量在16‰时，AD转化率在120h达到82.1％，此时产量高达8.33g/L。因此，适当提高甾醇的加量从经济角度考虑是可取的。