酵母木聚糖酶的酶学性质研究

被引量 : 0次 | 上传用户:iris_1204
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
木聚糖酶可以降解麦类饲料中的木聚糖,降低消化道食糜的黏性,破坏植物细胞壁,释放细胞内的养分,促进动物对饲料中营养物质的利用。毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是目前分子生物学领域中用于表达重组蛋白的标准工具之一。为确定木聚糖酶基因在毕赤酵母中表达后所分泌木聚糖酶的特性,本试验从体外和体内两个方面对该木聚糖酶的一些基本性质进行了研究。 首先在实验室采用还原糖法(即DNS法)对该木聚糖酶的一些基本性质(包括最适pH和pH稳定性、最适温度和温度稳定性、酶反应动力学参数、酶的底物特异性及蛋白酶对酶活性的影响)进行研究。在不同pH的缓冲液中测定该酶的活性,结果表明该酶的最适pH为6.1,在37、40、50℃保温30、60min后,酶在pH5—10之间具有较好的稳定性,不同保温时间对酶活影响差异不显著。在不同温度下测定该木聚糖酶的酶活,发现其最适反应温度为51℃,当将酶液在50、60、70、80、90、100℃分别保温30min后,发现其稳定性随温度升高而降低,60℃以下时稳定性较好。配制不同浓度的燕麦木聚糖底物,在51℃、pH6.1下,测得该木聚糖酶的米氏常数Km=6.49mg·mL-1,最大反应速度Vmax=21.05μg·mL-1·min-1。分别以燕麦木聚糖和桦木木聚糖为底物测定酶活,结果以桦木木聚糖为底物时的酶活仅为燕麦木聚糖为底物时的74.21%。37℃下用胃蛋白酶和胰蛋白酶处理木聚糖酶不同的时间(30、60、120min)后,发现胃蛋白酶处理组酶活损失较大,在60min时只剩1.08%的活性,而胰蛋白酶组在处理120min后仍然可保持80.95%的活性。 在确定了该木聚糖酶基本酶学性质的基础上,又选取10头21kg左右的健康DLY生长猪,按体重随机分成2组,分别饲喂添加了0.1%和1.0%木聚糖酶的饲料。正式试验前先预饲4天,第五天开始,每隔15min饲喂一头猪,于采食2h后将猪屠宰,收集胃、十二指肠和空肠食糜,测定其中木聚糖酶的活性,结果表明:在同一添加水平中,随着食糜的后移,消化道后段食糜中的酶活都显著高于前段,在0.1%组,胃、十二指肠、空肠每克食糜中的酶活分别是1172.84IU、2623.22IU、3627.97IU;而在1.0%组,各段消化道每克食糜中的酶活分别是2270.38IU、2656.81IU、4434.33IU;两个酶水平组差异不显著。 综上所述,在本试验研究条件下,该木聚糖酶的最适反应pH为6.1,在pH5—10之间稳定性较好;最适反应温度为51℃,液体状态时60℃以下稳定性较好。该木聚糖酶在胃中活性受到抑制,而进入到小肠后,酶的活性可以得到一定程度的恢复。
其他文献
稳定平台是实现隔离载体运动和姿态变化影响而始终保持水平(相对大地稳定)功能的稳定装置,在舰载飞机灯光引导系统中起到非常重要的作用。本论文从所研究的舰载机灯光引导系统
南京城东隧道采用自然通风方式,为判定其在火灾工况下能否满足安全性要求,开展了火灾工况下隧道自然通风模型实验,考察了最不利工况下烟气排除效果。从理论上探讨了模型与原
二茂铁及其衍生物由于其独特的光学、电学、催化等性质,在修饰电极上的开发与应用研究引起了人们极大的关注。本论文采用包合法、电聚合法及纳米掺杂法将二茂铁及其衍生物修
无线通信系统的迅猛发展带来了天线行业的勃勃生机,各种军事需求也推动着天线设计的不断更新。近年来,超宽带小型化天线已成为国际天线研究的前沿之一。本论文对超宽带缝隙天
我国的三级训练模式在计划经济时期曾经成功地运作过,为我国培养了一大批优秀运动员,为竞技体育的发展做出了巨大的贡献。但随着市场经济的发展,三级训练模式暴露出一系列的问题
本文采用液相还原法制备了铁镍纳米合金,即以KBH4为还原剂,在分散剂PEG存在下,于水相中将Fe2+、Ni2+还原为纳米微粉。TEM结果表明该合金具有须状结构,长度为200~400nm,直径2~4nm。纳
研究对象与目的 通过对两大经济区域——代表相对成熟的现代企业治理水平的美欧与代表新兴市场经济的东南亚——中的家族企业的比较,找出东西方家族企业治理的共性和差异及
最近一段时期,黑社会性质组织犯罪案件因为其在诉讼过程中激烈的诉辩、审辩对抗,成为各地各界检验刑事诉讼法运行的一大试金石。辩护律师滥用程序性权利与法官及公诉人对抗造
<正>食管支架应用于临床已有50余年的历史,其应用日趋广泛。本院自1997年1月开始至2014年3月共完成食管腔内支架置入术772例,取得了良好效果,现报告如下。食管支架置入适应症
气体钻井对于防止井下复杂有明显效果,能较大幅度提高机械钻速,节省钻头,提高采收率,有利于环保,近年来,在国内外应用得越来越广泛。国内气体钻井技术迅速发展,取得了一定的阶段性成