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目的本研究拟通过对本院临床分离的40株鲍曼不动杆菌耐药谱进行分析，筛选出对碳青霉烯类抗菌药物耐药的菌株，用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）技术检测碳青霉烯酶耐药基因，旨在阐明鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要机制，对指导临床合理使用抗菌药物，预防和控制碳青霉烯类耐药菌株的流行提供科学依据。同时采用差异蛋白组学的方法，利用SELDI-TOF-MS技术检测碳青霉烯类抗菌药物耐药和敏感菌株蛋白指纹图谱，结合聚类分析探索其用于查找碳青霉烯类抗菌药物耐药菌株亲缘性远近的临床价值。方法1.收集本院2011年1月~2012年12月临床分离的鲍曼不动杆菌株。2.使用MicroScanWalkAway96全自动微生物鉴定/药敏测试系统鉴定，并通过仪器检测其对妥布霉素、复方新诺明、哌拉西林、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢曲松、阿米卡星、头孢他啶、环丙沙星、头孢噻肟、头孢吡肟、庆大霉素、加替沙星、亚胺培南、左氧氟沙星等的最低抑菌浓度（MIC），分析其耐药情况，筛选出对碳青霉烯类抗菌药物耐药的鲍曼不动杆菌。3.用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）技术检测碳青霉烯类相关耐药基因IMP、VIM、OXA-23、OXA-24、OXA-58，然后对PCR扩增阳性产物电泳并成像，对PCR扩增阳性的产物进行测序，把测序结果与GenBank数据库进行比对。4.对所有40株鲍曼不动杆菌菌株先破坏细菌提取蛋白质，再用SELDI-TOF-MS技术及Au蛋白芯片检测细菌蛋白质指纹图谱。5.用Biomarker Wizard3.1软件进行分析获得的细菌蛋白质图谱，筛选出碳青霉烯类抗菌耐药和敏感鲍曼不动杆菌菌株相关差异表达蛋白，用SPSS19.0对碳青霉烯类抗菌耐药鲍曼不动杆菌进行聚类分析，追溯其临床感染的亲缘性。结果1.分离本院临床标本共获得40株鲍曼不动杆菌。2.对40株临床分离的鲍曼不动杆菌的耐药谱进行分析，获得对碳青霉烯类药物耐药鲍曼不动杆菌22株，耐药率为55%，这22株碳青霉烯类药物耐药鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物耐药率为100%。3.在22株碳青霉烯类药物耐药鲍曼不动杆菌耐药基因中，OXA-23阳性有16株，阳性率为72.7%， OXA-58阳性有5株，阳性率为22.7%， VIM阳性有7株，阳性率为31.8%，1株同时携带OXA-23、OXA-58和VIM基因，阳性率为4.5%，3株同时携带OXA-23和OXA-58基因，阳性率为13.6%，7株同时携带OXA-23和VIM基因，阳性率为31.8%；未检测到基因OXA-24和IMP。OXA-23、OXA-58、VIM基因扩增阳性产物测序结果经BLAST程序对比分析与NCBI的相应基因序列的同源性分别为99%、99%和97-99%。4.通过SELDI-TOF-MS对结合在Au芯片上的鲍曼不动杆菌蛋白质进行检测，获得所有鲍曼不动杆菌蛋白质指纹图，通过统计分析发现碳青霉烯类耐药和敏感的鲍曼不动杆菌菌株间蛋白质谱的表达具有显著性差异（P<0.05）。5.对碳青霉烯类药物耐药鲍曼不动杆菌质谱结果聚类分析，结果显示碳青霉烯类药物耐药鲍曼不动杆菌在院内的分布以A型为主，B型次之。结论1.鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药率比较高，尤其亚胺培南为55%。其余常用14种抗菌药物的耐药率均在70%以上。2.碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌OXA-23基因阳性率为72.7%，说明携带OXA-23基因可能为鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因之一，另外有1株携带OXA-23、OXA-58和VIM基因，3株携带OXA-23和OXA-58基因，7株携带OXA-23和VIM基因，说明多种耐药基因的携带是鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物耐药的重要原因。3.碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌有特征性的蛋白质指纹图。经过聚类分析显示碳青霉烯类药物耐药的鲍曼不动杆菌的分布以A型为主，B型次之，A型分为A1和A2两个亚型，并以A1为主，B型也分为B1，B2，并以B2为主。碳青霉烯类抗菌药物耐药的鲍曼不动杆菌蛋白质谱结果聚类分析能够判断细菌亲缘关系远近，可为临床流行病学检测提供依据。