12个堇菜属种质生殖生物学及远缘杂交亲和性研究

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堇菜属(Viola)植物多数为多年生,少数为二年生草本。中国堇菜属野生资源丰富,约有110种,很多具有三色堇栽培种少有的叶片奇特、耐热耐寒性强等优点。远缘杂交是培育新品种的重要途径,探讨堇菜属植物远缘杂交的亲和性,对于培育综合性状优良的堇菜属新种质具有重要意义。本研究以12个堇菜属种质为材料,对其核型进行了分析,研究了生殖生物学特性,在此基础上,优选相关的组合进行杂交,采用苯胺蓝染色荧光观察法、石蜡切片法观察分析了堇菜属杂交后授粉受精及胚胎发育情况,并对其杂交后代进行了鉴定,主要结论如下:6个野生堇菜核型分析结果如下:西山堇菜核型公式为2n=2x=24=10m+14sm,斑叶堇菜核型公式为2n=2x=24=14m+10sm,裂叶堇菜核型公式为2n=2x=24=20m+2st+2sm,鸡腿堇菜核型公式为2n=2x=20=8sm+12m,早开堇菜核型公式为2n=4x=48=36sm+12m,紫花地丁的核型公式为2n=4x=48=36sm+12m。核型不对称系数范围为:60.99%65.57%。根据最长与最短染色体长度比值和臂比大于2的染色体比例两项特征,西山堇菜、斑叶堇菜、裂叶堇菜、鸡腿堇菜、早开堇菜的核型分类均为2A型,紫花地丁属于3A核型。6个野生堇菜种质的进化程度高低为:紫花地丁>早开堇菜>西山堇菜>斑叶堇菜>鸡腿堇菜>裂叶堇菜。6个野生堇菜、3个角堇、3个大花三色堇种质开花时柱头均高于花药,柱头可授性和散粉时间有重叠。花粉/胚珠比、杂交指数以及授粉试验结果表明:早开堇菜、紫花地丁繁育系统为自交亲和的兼交系统,有时需要传粉者;其余10个种质的繁育系统均为兼性异交,部分自交亲和,需要传粉者。通过扫描电镜观察了12个堇菜属种质花粉表观形态,结果表明:6个野生堇菜花粉粒整体观为长椭球形或椭球型,花粉赤道面观长椭圆形,两端渐窄,极面观三裂圆形或近圆形,花粉表面较为光滑,有穿孔;角堇和大花三色堇花粉粒表观形状为矩形或五角柱形,花粉赤道面观长方形或五菱形,极面观四裂正方形或五角柱形,花粉具4-5孔沟,萌发沟以等间距环状分布,外壁纹饰为皱波状纹饰。早开堇菜花粉萌发适宜的培养基为:蔗糖280 g/L+硼酸240 mg/L+GA3 90mg/L+Ca(NO32 200 mg/L;大花三色堇花粉萌发适宜的培养基为:240 g/L蔗糖+260mg/L硼酸+GA3 90 mg/L+Ca(NO32 200 mg/L。适宜斑叶堇菜、裂叶花粉萌发的培养基为:285 g/L-1蔗糖+250 mg/L-1硼酸+50 mg/L-1 GA3+200 mg/L-1 Ca(NO32。不同贮藏温度对花粉生活力的影响差异较大,﹣80℃贮藏效果最佳。3种保护酶活性对裂叶堇菜、斑叶堇菜花粉萌发率的影响依次为:SOD>CAT>POD。苯胺蓝法观察花柱及石蜡切片观察子房结果表明:授粉后,花粉萌发少、花粉管在花柱花粉管通道内不能顺利生长是JB-1-1-2×西山堇菜、EYO-1-2-1-5×西山堇菜、EYO-1-2-1-5×早开堇菜杂交不育的根本原因。石蜡切片观察子房结果表明:胚乳退化解体、胚囊中空、胚胎发育缺乏营养供给是EYO-1-2-1-5×早开堇菜、JB-1-1-2×斑叶堇菜、DFM-16-2-2×裂叶堇菜、E01×早开堇菜、PXP-BT-D-1-1-4×早开堇菜、EYO-1-2-1-5×西山堇菜、JB-1-1-2×西山堇菜杂交不育的根本原因。通过对10个杂交后代表型性状鉴定,发现杂交后代偏母性遗传较多,初步判断早开堇菜×E01、早开堇菜×PXP-BT-1-1-4、西山堇菜×08H、西山堇菜×PXP-BT-D-1-1-4、西山堇菜×JB-1-1-2、斑叶堇菜×JB-1-1-2为真正的远缘杂种,但还需借助分子标记等手段来进一步确定。
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