七叶莲乙酸乙酯部位化学成分与生物活性研究

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传统中药七叶莲为五加科(Araliaceae)鹅掌柴属植物,七叶莲(Schefflera arboricola Hayata)的根或茎叶,是中国历史悠久的药用草本植物,其味辛,微苦,性温。主要分布于中国南部地区(如福建、广东、广西、台湾等地区),具有祛风止痛,活血消肿之功效,常用于风湿痹痛,脘腹疼痛,头痛,牙痛,痛经,产后腹痛,跌打肿痛,骨折等的治疗。七叶莲片是临床上用于抗炎镇痛的中成药,具有很好的止痛作用,但目前有关七叶莲镇痛作用的药效物质仍不明确,镇痛作用机制不清晰,导致无法建立七叶莲片等中药制剂科学先进的质量标准,限制了七叶莲片等中药制剂的广泛应用。为探明七叶莲的药效物质基础,本课题对七叶莲乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位进行了系统的化学成分分离,采用细胞模型对其中分离得到的4个单体成分进行抗炎活性筛选,进一步,采用动物实验观察其中抗炎活性较好的成分的镇痛效果,主要研究结果如下:(1)采用硅胶柱层析、凝胶Sephadex LH-20、重结晶等多种现代分离手段对七叶莲乙酸乙酯部位化学成分进行分离提纯,得到18个单体化合物,采用核磁共振波谱进行结构鉴定,共鉴定出13个化合物,分别为:vanillin(1)、4-羟基-3-甲氧基肉桂醛(2)、trans-triacontyl-4-hydroxy-3-methoxycinnamate(3)、kansuinin A(4)、kanseone(5)、(20R)-eupha-8,25-diene-3β,24-dio(6)、tibulusimide D(8)、反式阿魏酸(9)、β-谷甾醇(10)、acankoreagenin A(13)、hexadecyl ferulatek(15)、(3R,3’S,4R,4’S)-6,6’-dimethoxy-[3,3’-bichromane]-4,4’-diol(11)、kansenone(16)、21,24-cyclopentalanosta-3β,21,25-triol-8-ene(18)。其中化合物3、8、15、16、18为五加科和鹅掌柴属植物中首次分离得到,化合物10、11、13为首次从七叶莲中分离得到。(2)采用RAW264.7细胞炎症模型,对白桦脂醇、4,5-二咖啡酰奎宁酸、白桦脂酸、2,6-二甲氧基对苯醌等4个单体化合物的抗炎活性进行筛选,结果表明,4,5-二咖啡酰奎宁酸具有较好的抗炎作用。最后,采用小鼠醋酸扭体实验、小鼠热板实验和小鼠耳廓肿胀实验考察了4,5-二咖啡酰奎宁酸的镇痛作用。结果表明,4,5-二咖啡酰奎宁酸能明显缓解小鼠腹腔注射冰醋酸导致的疼痛,显著减少小鼠的扭体次数;小鼠在中、高剂量4,5-二咖啡酰奎宁酸作用下,其舔足时间显著延长,痛阈分别提高24.8%和34.4%;4,5-二咖啡酰奎宁酸能明显降低二甲苯所致小鼠耳廓肿胀程度,说明4,5-二咖啡酰奎宁酸具有抗炎镇痛的功效。同时,测定了小鼠血清中前列腺素E2(PGE2)和一氧化氮(NO)的含量,表明4,5-二咖啡酰奎宁酸可能是通过降低小鼠血清中PGE2和NO的含量来发挥其镇痛作用。本课题从七叶莲乙酸乙酯部位中分离得到18个单体化合物,共鉴定出13个化合物,其中,4,5-二咖啡酰奎宁酸化合物具有很好的抗炎镇痛效果,其镇痛作用机理可能是通过降低小鼠血清中PGE2和NO的含量来发挥其镇痛作用,本课题的研究成果可为七叶莲片的临床合理应用及今后的质量标准制定提供实验依据和理论基础。
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