茶树氨基酸转运子的鉴定

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuanhongsheng1982
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氨基酸是构成茶叶滋味与香气的重要组成部分,其含量与组成决定了茶叶的品质。氨基酸是高等植物氮素同化物长距离运输的主要形式,因此茶叶氨基酸含量取决于茶树对氮的吸收、同化效率及氨基酸在茶树体内转运效率及分配模式。氨基酸在植物体内的运输为一系列的跨膜转运,包括跨根系质膜被吸收、根系与地上部之间的长距离运输,即木质部与韧皮部装载和卸载实现氨基酸在不同器官间分配,这些过程中氨基酸跨膜进出植物细胞要依赖于质膜上的载体蛋白,即氨基酸转运蛋白。目前,氨基酸的转运与吸收机制及其生物学功能已成为植物分子生物学特别关注和研究的热点之一,并在拟南芥、水稻、豌豆、杨树等植物中已成功分离鉴定出多个氨基酸转运蛋白基因(氨基酸转运子),而有关茶树氨基酸转运子相关研究少有报道。围绕茶树氨基酸转运子挖掘,本研究从以下4个方面开展了相关研究工作:(1)明确了11个茶树品种一芽一叶、第二叶及成熟叶游离氨基酸含量及组分变化;(2)营养液培养条件下无机氮正常氮及低氮、及氨基酸态氮对茶树生长及新稍游离氨基酸含量的影响;(3)营养液培养条件下对福鼎大白茶苗进行不同氮处理:正常无机氮处理(CK),氮饥饿处理三天后分别进行正常无机氮处理5 h(NN,Normal nitrogen)、低浓度无机氮处理5 h(LN,Low nitrogen)及氨基酸态有机氮处理5 h(ON,Organic nitrogen),基于PacBio和Illumina测序技术对茶苗吸收根根尖和一芽一叶进行转录组测序,挖掘茶树响应不同氮素吸收转运调控相关的候选基因;(4)基于转录组测序预测的cDNA全长,克隆了4个候选氨基酸转运蛋白基因(CsYPQ1、CsCAT9、CsAAP3及CsLHT8)并进行基因功能分析。主要研究结果如下:1.不同茶类适制的11个茶树品种春茶游离氨基酸含量存在丰富的遗传变异,一芽一叶及第二叶游离氨基酸含量显著高于成熟叶,安吉白茶、金观音、浙农117及鄂茶10号第二叶游离氨基酸含量显著高于一芽一叶,分别高出45.82%、16.38%、8.21%和7.79%;紫鹃、五峰212、福云6号一芽一叶游离氨基酸含量显著高于第二叶;福鼎大白、迎霜、中茶108、金牡丹一芽一叶和第二叶游离氨基酸含量无显著性差异。游离氨基酸组分分析结果表明,所有品种一芽一叶和第二叶中都以茶氨酸含量最高,而成熟叶中安吉白茶、五峰212、中茶108、金牡丹、福鼎大白品种以谷氨酸含量最高。2.营养液培养条件下,2.50 m M正常水平无机氮(NO3-&NH4+)处理茶树新稍游离氨基酸含量显著高于0.28 m M低无机氮(NO3-&NH4+)处理和有机氮(0.15m M氨基酸(茶氨酸、丙氨酸、谷氨酸、缬氨酸、甘氨酸各0.03 m M)与0.13 m M无机氮(NO3-&NH4+)混合处理(模拟有机茶园),茶树均能较好地生长。氨基酸组分分析结果表明,正常氮处理,新稍茶氨酸、精氨酸和谷氨酸含量显著高于低无机氮处理及有机氮处理,新稍丙氨酸含量以有机无机氮混合处理最高,显著高于正常无机氮和低无机氮处理;其它组分含量各处理间差异不显著。3.不同氮处理福鼎大白吸收根根尖及新稍cDNA全长转录组测序共得到32967条Unigenes,注释到Nr、Swiss Prot、GO、COG数据库的Unigene数目分别为24127、28869、18101、24466条,其中9592条Unigene参与348个代谢通路。共注释了93个硝态氮转运蛋白,7个铵态氮转运蛋白,75硝态氮转运蛋白。与正常无机氮相比,氮饥饿三天后恢复供应有机氮在根部及叶片中差异基因数目最多。发现了1个AAP3、1个LHT8、3个YPQ1及4个AVT1同源基因在氮饥饿后供应有机氮处理中差异表达。同时,筛选到氮同化酶基因、转运蛋白、转录因子等多个与氮素吸收转运及调控相关的候选基因,筛选到多个可能参与氨基酸代谢途径的基因。4.克隆了CsYPQ1,CsAAP3,CsCAT9及CsLHT8等4个候选氨基酸转运子的cDNA全长;跨膜结构预测分析发现,CsYPQ1等4个蛋白均含有跨膜结构域;构建了CsYPQ1等4个基因的基因表达载体并转基因至拟南芥植株。
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