UNC5B-AS1对胃癌细胞迁移与侵袭的影响

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目的:探讨lncRNA UNC5B-AS1对胃癌细胞迁移和侵袭的影响。方法:1、从TCGA(The Cancer Genome Atlas,癌症基因组图集)和GEO(Gene expression omnibus,基因表达综合)数据库中下载人胃癌基因测序的原始数据,利用DE-seq软件包筛选出表达差异显著的mRNAs和lncRNAs,(logFC≥1或logFC≤-1,P<0.01被认为是显著差异)。2、利用GEPIA数据库中的人胃癌样本的原始数据,预测lncRNA UNC5B-AS1的表达与总生存期,无复发生存期等临床特征的相关性。3、收集28对人胃癌和癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(Real time fluorescence quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测UNC5B-AS1的表达水平。4、CCK-8实验检测敲低和过表达UNC5B-AS1对胃癌细胞活力的影响。5、划痕和侵袭实验检测敲低和过表达UNC5B-AS1对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。6、mirBase、miRTarBase和miRDB网站用于预测UNC5B-AS1-hsa-miRNA-4632-5p-KMT2A的ceRNA机制。7、RPISeq数据库用于预测UNC5B-AS1与KMT2A是否直接结合,以及结合部位。结果:1、分析TCGA和GEO原始RNA测序数据的结果显示与邻近的癌旁组织相比,UNC5B-AS1在人胃癌组织中表达显著降低。2、UNC5B-AS1表达与胃癌患者的总生存期(Overall survival,OS)无显著影响。进一步对UNC5B-AS1进行临床相关分析,结果显示高表达UNC5B-AS1的胃癌患者无复发生存期(Disease free survival,DFS)较差,且相对于stageⅠ分期胃癌患者,stageⅡ-Ⅳ分期的胃癌患者高表达UNC5B-AS1。3、收集28对医院采集的人胃癌组织进行qRT-PCR扩增UNC5B-AS1,结果显示UNC5B-AS1的表达较癌旁组织相比显著低表达。4、在胃癌细胞株IM95细胞和MKN-45细胞中敲低UNC5B-AS1,增强胃癌细胞的迁徙和侵袭能力;过表达UNC5B-AS1抑制胃癌细胞的迁徙和侵袭能力。5、通过mirBase网站,进一步预测UNC5B-AS1的miRNA点,结果显示UNC5B-AS1可能作为hsa-miRNA-4632-5p的海绵。于是进一步利用miRTarBase和miRDB网站进一步预测可能与hsa-miRNA-4632-5p结合的mRNA,结果显示共21个mRNA可能与其结合。结合KEGG通路分析,发现KMT2A和KMT2D显著富集于Lysine degradation通路。在包含111例胃癌组织的GSE54129数据中,通过person相关性分析,发现UNC5B-AS1与KMT2A的表达存在显著的负相关性,然而UNC5B-AS1与KMT2D的表达无明显相关性。最后,通过RPISeq数据库进一步预测UNC5B-AS1与KMT2A是否直接结合,结果显示,UNC5B-AS1的3’端和5’端序列可能与KMT2A显著结合。结论:UNC5B-AS1通过与KMT2A蛋白结合下调KMT2A抑制胃癌细胞迁移和侵袭。
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