【目的】静电纺丝是一种制备纳米纤维的常用方法,能够制备比表面积大、孔隙率高、能够较好的模拟细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的支架材料。通过加入药物成分可以使电纺丝支架成为载药体系,随着支架材料成分的降解药物会被缓慢释放出来,对周围的细胞和组织产生作用。牙根再生是牙再生组织工程的重要一步,能否恢复具有生物活性的牙根是其关键。本课题拟利用聚已内酯、丝素蛋白电纺丝膜片作为支架材料,而且在其中加入TDM浸提的活性成分。许多研究发现TDM及其释放的活性物质能够诱导牙源性干细胞向成牙方向分化。故我们推测加入TDM的电纺丝膜片也会在一定程度上具备的成牙方向诱导能力,使其有希望成为牙周膜再生的支架材料之一。【方法】首先制备处理过的牙本质基质(TDM)的浸提液以及提纯丝素蛋白(SF),静电纺丝法制备PCL/SF和PCL/SF/TDM两组电纺支架材料。扫面电镜观测其表面形态并检测纤维直径,Elisa检测PCL/SF/TDM组中COL-1和TGF-β的释放情况。原代培养人牙囊细胞(DFCs)并鉴定其来源、表面抗原分子表型、分化潜能。再将支架材料与人牙囊细胞复合培养,免疫荧光计数支架材料上的细胞数量,CCK8检测支架上的细胞活力,扫描电镜观测细胞表面形态。Real-time PCR和Western blot检测培养在电纺支架材料上的牙囊细胞的成牙相关基因及蛋白表达情况。【结果】(1)PCL/SF组和PCL/SF/TDM组是连续且排列方向较为一致的纳米纤维,平均直径在180nm-190nm之间;(2)COL-1和TGF-β两者释放情况类似,在10天内大部分药物缓慢释放,之后药物释放量不再有较大的增加;(3)分离纯化的牙囊细胞表面分子阳性表达CD73、CD90、CD105、CD146;阴性表达CD14、CD34、CD45;具备成骨、成脂、成神经分化的潜能;(4)细胞荧光计数和CCK8结果类似,种植于支架材料上的细胞在初期相比对照组增殖缓慢,但在第7天细胞增殖活性和细胞数量均与对照组没有差异;(5)细胞排列成长梭形,细胞长轴方向与纳米纤维方向相一致;(6)种植于电纺支架上的细胞成牙成骨相关的基因和蛋白表达均较对照组有上调,且表达程度随时间的推移而升高,其中PCL/SF/TDM组的成牙基因又相比PCL/SF组要高。【结论】本实验中制备的PCL/SF/TDM支架材料具备成牙诱导能力,能够诱导牙囊细胞向成牙方向分化,可作为牙周组织再生的支架材料。