【摘 要】
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背景新生儿黄疸是新生儿期最常见的一种疾病,临床可影响80%早产儿和60%足月儿,目前主要治疗方法是蓝光光疗,光疗可影响新生儿肠道菌群的定植。前期研究发现光疗可造成新生儿双歧杆菌和乳杆菌的丰度下降,但联合益生菌治疗可明显缩短黄疸病程,减少光疗带来的近远期不良影响,达到协同疗效。目前光疗同时补充动物双歧杆菌BB-12对新生儿黄疸治疗的作用机制尚不明确,本研究选用光疗同时补充动物双歧杆菌BB-12进行探
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背景新生儿黄疸是新生儿期最常见的一种疾病,临床可影响80%早产儿和60%足月儿,目前主要治疗方法是蓝光光疗,光疗可影响新生儿肠道菌群的定植。前期研究发现光疗可造成新生儿双歧杆菌和乳杆菌的丰度下降,但联合益生菌治疗可明显缩短黄疸病程,减少光疗带来的近远期不良影响,达到协同疗效。目前光疗同时补充动物双歧杆菌BB-12对新生儿黄疸治疗的作用机制尚不明确,本研究选用光疗同时补充动物双歧杆菌BB-12进行探讨对肠道菌群定植的影响、代谢组学改变及临床疗效,动物双歧杆菌BB-12能否成功定植黄疸新生儿肠道,并缓解光疗的近远期不良影响需临床研究验证。目的研究光疗对新生儿黄疸肠道菌群的影响,观察添加动物双歧杆菌BB-12如何影响新生儿肠道菌群的变化,并通过代谢组学分析代谢物是通过何种代谢通路影响肠道菌群定植,从而分析菌群变化的机制。同时观察动物双歧杆菌BB-12补充以后对光疗疗效的影响,从而减轻近远期的不良影响,为新生儿黄疸添加益生菌株的合理性提供临床依据。方法1.筛选在上海市第六人民医院临港院区系统产检并足月分娩,符合纳入及排除标准的达到光疗指征的黄疸新生儿共25人,分为实验组14人,对照组11人,家属在光疗前签署知情同意书后纳入本研究,随访到新生儿出生后30 d。2.实验组新生儿蓝光光疗同时给予每日口服一次动物双歧杆菌BB-12 0.3 m L,包含1×10~9个菌落形成单位（Conlony Forming Units,CFU）治疗,对照组新生儿仅接受了蓝光光疗。3.收集新生儿光疗前、光疗12 h、24 h、36 h和分娩后10 d、20 d、30 d的粪便标本,基于16S r RNA宏基因组DNA测序技术对新生儿肠道微生物的构成及丰度、alpha多样性、beta多样性、科属种水平分析菌群差异、网络图进行多因素综合评估。4.将临床收集的新鲜大便样本通过代谢组学的液相色谱-质谱联用技术（LC/MS）靶向测定代谢通路及其产物,并作生物学信息分析描述。5.使用SPSS 21.0统计软件对数据进行处理,组间差异比较采用单因素方差分析、Mann-Whitney检验、t检验和卡方检验。结果1.宏基因组测序结果:⑴菌群组成结构分析:光疗可致微生物种类（operational taxonomic units,OTUS）数量明显下降,停止光疗后OUTS的数量逐渐恢复,光疗对于实验组菌科变化的影响更小。⑵Alpha多样性分析:光疗后菌群丰富度和多样性分别呈现先上升后下降,随着时间的增加,多样性和丰富度会逐渐恢复到光疗前。⑶Beta多样性分析:光疗影响菌群变化,实验组存在统计学差异,对照组无统计学差异。⑷科水平菌群分析:光疗影响双歧杆菌科的丰度,两组自身前后对照以及两组同期对照都没有统计学差异,但光疗对于实验组菌科变化的影响更小。⑸属水平菌群分析:光疗影响双歧杆菌属的变化;实验组呈上升趋势,对照组呈下降趋势,组间比较不具有统计学差异;两组同期对照无统计学差异,且光疗对于实验组菌属变化的影响更小。⑹种水平菌群分析:光疗影响动物双歧杆菌的变化,其中实验组与光疗前相比有统计学差异;且随着时间的增加,两组肠道菌群的差异越来越明显。⑺线性判别效应量（Linear discriminant analysis Effect Size,Lef Se）分析:对照组的差异物种明显多于实验组。2.代谢组学结果:⑴主成分分析（Principal components analysis,PCA）:两组前后代谢物组成结构差异较大。⑵差异代谢物分析:实验组和对照组代谢物不同,存在明显的差异。⑶富集分析:两组差异代谢物显著富集的代谢通路,实验组一共富集了48个代谢通路,对照组富集了31个代谢通路,可见实验组对代谢的影响明显高于对照组。3.临床结果:实验组在蓝光治疗期间每日大便次数＞3次的发生率较低（P＜0.05）。结论研究结果表明,口服动物双歧杆菌BB-12可影响肠道菌群变化,改善肠道动力,调节肠道功能,减少了患儿排便的次数。同时动物双歧杆菌BB-12丰富了双歧杆菌的数量,保证有益菌繁殖,抑制有害菌生长,避免肠道菌群多样性的变化。双歧杆菌参与了胆红素代谢,动物双歧杆菌BB-12影响新生儿代谢通路,增加了有益的代谢产物,推测可能通过胆汁酸代谢通路实现。且至少在给药几周内,动物双歧杆菌BB-12可以在黄疸患儿的肠道定殖,动物双歧杆菌BB-12是新生儿黄疸的潜在标志物,可能为临床治疗新生儿黄疸提供新靶点。
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