菟丝子发酵提取物的制备及其生物活性研究

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采用发酵提取植物活性物质,可提升各物质的提取率的同时,增强生物活性。本论文通过采用人体益生菌发酵提取菟丝子,对比菟丝子热水提取物,探究益生菌发酵提取物在DPPH清除率、·OH清除率、TIA、SOD活性、Ha Ca T细胞与B16细胞毒性、对皮肤菌群生长等方面的作用,对菟丝子发酵物中菟丝子发酵多糖进行纯化后,采用酶解法,获得低分子量菟丝子发酵多糖,进一步探究菟丝子发酵提取物活性的提升是否与菟丝子多糖被降解有关。本课题研究结果如下:(1)对菟丝子分别采用益生菌发酵提取、常规热水提、常温闪式提取法分别获得菟丝子提取物,结果显示,热水提取法对总糖提取较为有利,总糖提取率为13.10%;闪式提取法更有利于黄酮提取,提取15min提取率为1.119%;益生菌发酵提取液中,还原糖、总糖与蛋白含量均超过了热水提,最高分别为(0.750±0.015)mg/m L、(1.651±0.52)mg/m L、(0.516±0.014)mg/m L,黄酮为(0.130±0.018)mg/m L。(2)对于菟丝子发酵提取物、菟丝子热水提取物,经过发酵提取的菟子丝提取物在DPPH清除率、·OH清除率、蘑菇酪氨酸酶抑制率及透明质酸酶抑制率四个方面均具有更强的生物活性;不同分子量菟丝子发酵多糖在DPPH清除率、·OH清除率及透明质酸酶抑制率方面与菟丝子发酵提取物具有高度的相似性,且菟丝子发酵多糖在一定质量浓度下,随着分子量的降低,其表现出的生物活性更强。菟丝子发酵提取物均表现出酪氨酸酶活性的抑制作用,随质量浓度增加到4mg/m L时抑制率趋于稳定于36%;菟丝子热水提取物表现出低浓度抑制酪氨酸酶,高浓度激活酪氨酸酶的作用;菟丝子发酵多糖在抑制酪氨酸酶过程中具有一定的辅助作用。(3)以菟丝子发酵提取物、菟丝子热水提取物、不同分子量菟丝子发酵多糖为对象,不同浓度样品对以Ha Ca T细胞与B16细胞为模型的测试中,结果显示:上述几种样品在0.1mg/m L~20mg/m L范围内未表现出明显的细胞毒性,且低浓度菟丝子多糖样品对细胞生长具有一定促进作用;样品对SOD活性均具有一定的增强作用;其中菟丝子热水提取物在B16细胞内酪氨酸酶活性及B16细胞黑素生成率方面,表现出低浓度抑制酶活,产生较少的黑素,高浓度(>2mg/m L)表现出激活酪氨酸酶的作用;菟丝子发酵提取物,在0.1mg/m L~20mg/m L浓度范围内,一直表现出对B16细胞内酪氨酸酶活性的抑制作用,使其黑素生成量减少。(4)选取菟丝子发酵提取物、菟丝子热水提取物、菟丝子发酵多糖、低分子量菟丝子发酵多糖、透明质酸钠样、生理盐水样六种样品,通过16Sr RNA测序,探究六种样品对皮肤菌群作用后的丰度变化规律,结果显示:与生理盐水样相比,菟丝子发酵提取物可分别提升放线菌门与变形菌门在皮肤菌群中的占比至77.7%、5.85%,同时降低厚壁菌门的占比至12.06%;菟丝子发酵提取物样与低分子量菟丝子发酵多糖样中,皮肤杆菌属(Cutibacterium)丰度均得到提升分别至58.39%、60.22%,棒状杆菌属(Corynebacterium)丰度提升到16.02%、9.04%,葡萄球菌属(Staphylococcus)丰度分别下降到3.76%、1.82%;说明菟丝子发酵提取物与低分子量菟丝子发酵多糖对皮肤菌群具有较大的调节作用。
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