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Mx蛋白广泛存在于生物体内,是一种由Ⅰ干扰素诱导的动力蛋白GTP酶,具有广谱的抗病毒活性。编码Mx蛋白的基因是由Lindenmann等在研究野生型A2G小鼠上发现的,因能抵抗粘液病毒而命名为Mx(myxovirus resistance)基因。目前,对于Mx基因的研究大多集中在人类、小鼠等哺乳动物上,而对其他动物如家禽的研究相对较少。本研究以鸽为研究对象,采用RT-PCR法成功克隆出了鸽Mx基因全长编码区,并对其进行了生物信息学分析;通过构建真核表达载体,转染293T细胞,并成功在其中进行了表达;采用实时荧光定量PCR技术研究了青年鸽和童鸽Mx基因在不同组织中的表达规律以及不同品种鸽Mx基因在相同组织中的表达规律。主要的研究结果如下:1.鸽Mx基因的克隆及序列分析根据GenBank上公布的鸽基因组序列设计特异性引物,成功克隆出了 Mx基因编码区全长。利用生物信息学等软件分析其序列特征,鸽Mx基因编码区全长2106bp,编码701个氨基酸残基,且具有脊椎动物共有的结构特征。预测其蛋白分子量大小为79.7KD,等电点为6.37。通过与GenBank中已登录的脊椎动物Mx基因序列比对,核昔酸序列的同源性为54.0%-78.0%,氨基酸序列的同源性为41.3%-69.3%。鸽与塞内加尔鳎的核苷酸同源性最低,为54.0%;与鸿雁的核苷酸同源性最高,为78.0%。鸽与绵羊的氨基酸同源性最低,为41.3%;与野鸭的氨基酸同源性最高,为69.3%。2.鸽Mx基因真核表达载体的建立及表达根据克隆得到的Mx基因编码区全长和表达载体序列设计含有酶位点的特异性引物,将目的基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)/myc-hisA中,并将构建成功的真核表达载体pcDNA3.1(-)/myc-hisA-Mx,转染到 293T细胞中,经 RT-PCR和 Western blot检测后,结果表明,Mx基因能够成功的在293T细胞中表达。真核表达载体pcDNA3.1(-)/myc-hisA-Mx的成功构建和表达,为Mx蛋白生物学功能的进一步研究提供了坚实的基础和保障。3.鸽Mx基因在不同组织中的表达规律采用实时荧光定量PCR技术研究了鸽Mx基因在不同组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏、小肠、肌肉)中的相对表达量。结果发现:鸽Mx基因在青年鸽和童鸽中,在心脏和肌肉中几乎不表达,在胰脏和脾脏中表达量较高;深王鸽和卡奴鸽在相同组织中的表达情况为两种鸽的Mx基因在心脏、肝脏、肺脏、肾脏、胰脏以及肌肉组织中其表达量均无显著性差异,只有脾脏和小肠的表达存在显著性差异,其中深王鸽脾脏Mx基因表达量极显著(p<0.01)高于卡奴鸽脾脏表达量,而卡奴鸽的小肠Mx基因的表达量显著(p<0.05)高于深王鸽小肠表达量。